Maklumat

12.9: Penyuntingan RNA - Biologi


Penyuntingan RNA merujuk kepada mengubah urutan RNA setelah transkripsi, baik dengan menambahkan nukleotida, membawanya, atau mengganti satu dengan yang lain. Tahap penyuntingan adalah dramatik dalam beberapa mRNA, mis. di mitokondria trypansomes dan Leishmania. Sebagai contoh, untuk beberapa mRNA 55% urutan nukleotida ditambahkan selepas transkripsi! Dalam banyak kes yang dicirikan setakat ini, sebilangan kecil U dimasukkan ke banyak tempat di mRNA. Contoh lain untuk mengeluarkan U dan menambahkan C dikenali untuk gen mitokondria lain dari organisma lain.

Dalam sekurang-kurangnya beberapa kes, nukleotida tambahan ditambahkan di bawah arahan RNA panduan yang dikodkan di tempat lain dalam genom mitokondria. Sebahagian panduan RNA adalah pelengkap mRNA di sekitar kedudukan di mana nukleotida akan ditambahkan (Rajah 3.3.16). U pada hujung 3 'RNA panduan memulakan serangkaian tindak balas pemindahan fosforester untuk memasukkan dirinya ke dalam mRNA (lihat bahagian bawah Rajah 3.3.16). Lebih banyak U di hujung 3 'RNA panduan boleh ditambah, satu demi satu. Perhatikan persamaan mekanisme antara penyisipan nukleotida ini (penyuntingan) dan penyambungan diri intron Kumpulan I.

Untuk keadaan di mana satu segmen DNA mengekod mRNA yang tidak diedit dan dua segmen DNA yang lain menyandikan RNA panduan yang diperlukan untuk penyuntingan, "gen" dikodekan dalam tiga bahagian, mutasi yang akan melengkapkan dalam trans! Ini adalah contoh balas bagi salah satu definisi gen kami yang paling kuat.

Pada mamalia, dibuat dua bentuk apolipoprotein B yang berbeza, satu di hati dan satu lagi di dalam usus. Bentuk usus jauh lebih pendek kerana kodon penamatan sebelumnya. Anehnya, hanya satu gen yang dijumpai dan ia mesti mengekod kedua-duanya dari ApoB. Enzim spesif mesti mengubah satu nukleotida mRNA untuk apolipoprotein B (C dalam kodon 2153, CAA) pasca ‑ transkripsi dari C ke U untuk menghasilkan kodon penamatan (UAA) yang terdapat dalam bentuk usus.

Aktiviti enzimatik ini terdapat dalam protein dengan tidak komponen RNA yang jelas, dan oleh itu tidak ada RNA panduan yang jelas. Oleh itu, ia kelihatan berfungsi dengan mekanisme yang berbeza dari penyuntingan dalam protokol mitokondria (lihat. Mis. Greeve, J. et al., 1991, Nucleic Acids Research 19: 3569-3576).


Biologi molekul

Molekul Biologi, Edisi Kedua, mengkaji konsep asas biologi molekul sambil menggabungkan literatur utama dari penyelidik terkemuka hari ini. Edisi yang dikemas kini ini merangkumi bahagian Fokus pada Penyelidikan Berkaitan yang mengintegrasikan literatur utama dari Cell Press dan memberi tumpuan untuk membantu pelajar belajar membaca dan memahami penyelidikan untuk mempersiapkan mereka untuk dunia ilmiah.

Panduan Kajian Sel Akademik yang baru menampilkan semua artikel dari teks dengan kajian kes serentak untuk membantu pelajar membina asas dalam kandungan sambil membolehkan mereka membuat hubungan yang sesuai dengan teks. Animasi yang disediakan menangani topik seperti pemurnian protein, transkripsi, reaksi penyambungan, pembahagian sel dan replikasi DNA dan SDS-PAGE. Teks ini juga merangkumi bab yang dikemas kini mengenai Genomik dan Biologi Sistem, Proteomik, Genetik Bakteria dan Evolusi Molekul dan RNA. Pakej tambahan yang dikemas kini merangkumi kad flash, kuiz diri dalam talian, rujukan dengan pautan ke kandungan luar dan slaid PowerPoint dengan gambar.

Teks ini dirancang untuk pelajar sarjana yang mengikuti kursus dalam Biologi Molekul dan pelajar peringkat atas yang mempelajari Biologi Sel, Mikrobiologi, Genetik, Biologi, Farmakologi, Bioteknologi, Biokimia, dan Pertanian.


Abstrak

Pada tahun 1989, tiga makmal (di Kanada, Perancis dan Jerman) secara bebas dan serentak melaporkan penemuan penyuntingan RNA C-to-U di mitokondria tumbuhan (1-3). Untuk memperingati ulang tahun ke-20 penemuan ini, para pemimpin ketiga pasukan penyelidikan telah menulis karangan peribadi yang menggambarkan peristiwa yang menjelang penemuan di setiap makmal mereka. Karangan ini bertujuan bukan sahaja untuk menangkap fakta sejarah tetapi juga untuk menggambarkan konvergensi yang tidak dijangka dalam proses penemuan saintifik, dengan kumpulan yang berbeda membuat kesimpulan yang sama, sering sangat dekat dalam satu masa, mengambil pelbagai jenis bukti dan kadang kala agak berbeza hipotesis dan pendekatan. Maklumat latar belakang penting yang berkaitan dengan penyuntingan RNA secara umum dan penyuntingan RNA pada organel tumbuhan khususnya diberikan dalam gambaran keseluruhan ini. © 2009 IUBMB IUBMB Life, 61: 1101-1104, 2009


2. Kepelbagaian Fungsional dan Struktural RNA: Asas Pembangunan Aptamer

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, kesedaran mengenai pentingnya RNA terus meningkat di kalangan penyelidik, kerana senarai pelbagai fungsi RNA yang terus berkembang (dikaji oleh Breaker dan Joyce) [35]. Terdapat sebilangan besar molekul RNA bukan kod (ncRNA) dalam sel prokariotik dan eukariotik, yang kebanyakannya terlibat dalam banyak proses biologi yang diketahui, seperti transkripsi, pematangan RNA, terjemahan, dan kawalan epigenetik terhadap ekspresi gen. Lebih-lebih lagi, messenger RNA (mRNA) menyampaikan maklumat genetik dari genom ke mesin terjemahan sel. RNA ribosomal yang sangat tersusun (rRNA) dan RNA pemindahan (tRNA) memainkan peranan penting dalam terjemahan. Yang pertama adalah bahagian struktur dan pemangkin ribosom [36], dan yang terakhir adalah molekul penyesuai [37]. Kedua-dua ribozim sintetik dan asli menunjukkan aktiviti enzimatik [38,39,40]. RNA kecil bakteria (sRNA) [41] RNA mikro (miRNA) [42] dan RNA gangguan kecil eukariotik (siRNA) [43] mengambil bahagian dalam pengaturan ekspresi gen. RNA nuklear kecil (snRNA) terlibat dalam penyambungan mRNA eukariotik [44]. RNA nukleolar kecil (snoRNA) terlibat dalam pengubahsuaian kimia (metilasi dan pseudouridylation) dan pematangan rRNA eukariotik [45].

Sebenarnya, aptamers RNA secara selektif mengikat pelbagai sasaran dan mempengaruhi fungsinya [46]. Aptazim adalah molekul buatan yang terbuat dari aptamer dan ribozim, pertama kali diperkenalkan pada tahun 1997 [47]. Oleh itu, aptazim mempunyai dua motif struktur utama, satu untuk pengiktirafan sementara yang lain adalah pemangkin, selain kawasan jarak untuk mengawal daya intermolekul dan interaksi antara kedua motif tersebut. Riboswitch adalah contoh lain termasuk motif aptamer RNA dan motif ekspresi. Setelah mengikat ligan, bahagian aptamer dari riboswitches menyebabkan perubahan konformasi pada keseluruhan molekul, mengakibatkan perubahan yang signifikan dalam kadar terjemahan dan ekspresi gen [48].

Kepelbagaian fungsional molekul RNA memperlihatkan potensi besar untuk pengembangan ubat berasaskan RNA baru. Calon utama molekul tersebut tergolong dalam kumpulan aptamer RNA, miRNA, dan siRNA. Dua molekul terakhir mengatur dan menekan sintesis protein, oleh itu menjadikan calon ubat antineoplastik yang hebat [49,50]. Aptamers RNA, bersama dengan miRNA dan siRNA, dapat meningkatkan penghantaran ubat ke molekul sasaran.

Salah satu kelemahan utama dalam merangkul RNA untuk tujuan terapeutik adalah waktu paruh yang pendek, kerana berlakunya nuklease dalam plasma darah. Parameter farmakokinetik ini menentukan pengedaran dan pelepasan sangat penting bagi sebarang ubat. Sebenarnya, oligonukleotida wujud tidak lebih dari beberapa puluh minit dalam plasma darah, menjadikan calon ubat tersebut tidak menguntungkan. Walau bagaimanapun, masalah ini telah diselesaikan dengan memperkenalkan beberapa modifikasi kimia pada nukleotida untuk melindungi polimer RNA dari kesan hidrolisis nuklease dan dengan meningkatkan sifat farmakokinetik sambil mengekalkan aktiviti farmakodinamik. Penyelesaian lain untuk memanjangkan jangka hayat adalah dengan menggunakan nanopartikel RNA [51,52,53].

Sekiranya menggunakan nukleotida yang diubah secara kimia, mereka dapat ditambahkan sebelum atau sesudah SELEX. Untuk pilihan pertama, nukleosida trifosfat dapat digunakan untuk sintesis aptamer setelah memperkenalkan salah satu modifikasi berikut pada kedudukan 2 & # x02032 gula ribosa: 2 & # x02032 amino pyrimidine, 2 & # x02032 fluoropyrimidine, 2 & # x02032-O-methylpyrine, dan 2 & # x02032-O-methylpyrimidine. Dibantu oleh polimerase RNA khas, misalnya, polimerase RNA T7, 2-Omonomer pyrimidine yang dimetilasi dapat dikatalisis untuk mensintesis polimer RNA [54]. Untuk pilihan kedua, perlu diperhatikan bahawa menambahkan bahagian boleh mempengaruhi penyesuaian aptamer dan aktivitinya, dengan sewajarnya. Atas sebab ini, pengubahsuaian selepas SELEX biasanya dilakukan pada 5 & # x02032 dan 3 & # x02032 hujung nukleotida dengan menambahkan komponen polietilena glikol (PEG), biotin, atau lipid. Untuk menstabilkan aptamer, ikatan tambahan dibuat antara oksigen 2 & # x02032 dan 4 & # x02032 karbon dalam molekul ribosa, membentuk apa yang dipanggil & # x0201 asid nukleik berputar & # x0201d (LNA) [53,55,56].

Sebenarnya, struktur 3-D dan fungsi aptamer mana-mana saling berkaitan. Beberapa motif struktur RNA merangkumi persimpangan tiga arah terbuka dan tersusun [57], persimpangan empat arah yang serupa dengan struktur Holliday & # x02019s [58], gelung ciuman, 90 & # x000b0 keratan [59], sudut pseudo-torsional [60], dan banyak struktur lain. Sebilangan besar struktur yang berbeza dapat dirancang berdasarkan motif yang disebutkan di atas, yang memungkinkan aptamer untuk mengikat semua jenis sasaran.

Untuk membuat aptamer dan menyokong strukturnya, ia harus dimasukkan ke dalam perancah supramolekul molekul RNA. Human tRNA Lys adalah salah satu model perancah RNA yang dipelajari dengan baik, selain tRNA lain [61]. Melekatkan aptamer di batang antikodon dalam tRNA mendorong lipatan yang betul. Selain itu, pendekatan ini membolehkan sintesis aptamer heterologi dalam sel bakteria, dalam jumlah yang mencukupi untuk melakukan eksperimen biokimia dan penghabluran [62].

Ketahanan terhadap nuklease intraselular dianggap salah satu kriteria terpenting dalam proses pemilihan perancah supramolekul untuk memasukkan aptamer. Pembelahan perancah RNA boleh menyebabkan pemisahan aptamer dan kehilangan tindakannya pada sasaran. Ini adalah kelemahan perancah berasaskan tRNA [63]. Menggunakan rRNA 5S dari Vibrio proteolyticus (V5) sebagai perancah bantalan aptamer juga telah dilaporkan, di mana heliks domain III dan gelung C telah digantikan oleh aptamer. Hasilnya, aptamer berfungsi terhadap faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) berjaya dihasilkan di V. proteolitikus (V5) [64].

Perancah yang lebih biasa termasuk phi9 3WJ, motif simpang tiga arah (3WJ) yang tersusun dari bakteriofag phi29. Motif ini terdiri daripada tiga serpihan RNA pendek (& # x0226420 nukleotida) semasa pemasangan, struktur keseluruhan menunjukkan kestabilan termodinamik yang tinggi. Telah dilaporkan bahawa struktur ini stabil dalam larutan yang mengandungi 8 M urea dan ia tidak terlepas pada kepekatan yang lebih rendah [65].

Struktur percabangan Phi29 3WJ sangat berguna untuk memasukkan modul fungsi yang berbeza ke dalam setiap tiga heliks. Perancah ini memudahkan lipatan molekul lain yang betul bergabung dalam strukturnya. Oleh itu, perancah ini mampu membawa molekul yang berbeza, termasuk aptamers, miRNA, ribozim, dan juga ligan yang mengikat pada reseptor sel & setiap x boleh diletakkan di cabang perancah yang terpisah. Berkat lipatan masing-masing molekul yang betul, fungsinya dipertahankan, termasuk pengikatan sel, penembusan sel, penindasan ekspresi gen, fungsi pemangkin, dan lain-lain [66,67,68].

Walaupun begitu, dalam sel mamalia, bersama dengan aptamers berukuran penuh, berdasarkan perancah Phi29 3WJ, beberapa varian pendek aptamers telah dijumpai. Salah satu sebab yang mungkin berlaku untuk masalah ini adalah bahawa berhampiran penghentian RNA-polimerase III, terdapat urutan UUUGUU, yang menyebabkan penghentian transkripsi pramatang. Filonov et al. merancang perancah F30 berdasarkan Phi29 3WJ setelah mengubah urutan, dan penamatan pramatang dihentikan [63].


12.9: Penyuntingan RNA - Biologi

# ] # ׸ q ͛6l ٰ, W iY E Y f͉ Сe l! ' F TWrE) b Ww ’ 1 / 6l ٳ f͛6! Yt- 1H Z f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l W m + 1 EU c f͛6Q 6 Os 0 3f & ” M |

! r | Y $ [) b ^ ׉ ́- x` ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͛6l ٳ f͉ # _ ߠ d zLVc

L W n M $ t $ x. ߎ ZY v # 6l O i @ Ÿ ۆ 0xž FGq] * Ѭ ƴq + eZ6 ۂ 54> 9, y15 '3f͛6l ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ f͛6l͛6l ٳ F6L ٳ S6l ٳ S6l ٳ F6L ٳ Fl ٳ F6L ٳ F6L ٳ f͕A6l9 6l ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F6L ٳ F endstream endobj 94 0 obj> endobj 95 0 obj> str eam H n 0 y C i% V tH # @ b u "A (v ) NT 5 # D 3g n 4t7o .tm Z% `3 W ߴ U | ՝ 2 > 0 mw ޼% ߸ + ​​ z

^ s B W ó endstream endobj 96 0 obj> endobj 97 0 obj> stream H n @ ཟ b "2f $ @" J ` R1 1 | s | Pj X p? g m . _ ] ܱ i > ^ / OM sW7 8 V > i

6I ί N O5 & e Z o . ռ C yͼF. q | > endobj 102 0 obj> endobj 103 0 obj > aliran H j 0

endstream endobj 104 0 obj> endobj 105 0 obj> stream H n 0 y C % Q% Բ V ? tH # D x q IC L $ U


CRISPR / Cascade 9-Mediated Genome Editing-Challenges and Peluang

Pengulangan Palindromik Berterusan Berkelompok (CRISPR) dan Cascade 9 (juga dikenali sebagai Cas9, protein CRISPR 9) memberikan perlindungan terhadap virus atau plasmid yang menyerang. Sistem CRISPR / Cascade 9 merupakan salah satu teknologi genom paling kuat yang ada pada para penyelidik hari ini. Sejauh ini, teknologi ini telah memungkinkan penyuntingan dan pengubahsuaian genom yang cekap dalam beberapa organisma model dan berjaya digunakan dalam kejuruteraan bioperubatan dan bioperubatan. Walau bagaimanapun, cabaran untuk manipulasi genetik yang cekap dan selamat dalam beberapa organisma tetap ada. Di sini, kami mengkaji pendekatan fungsional dan cabaran masa depan yang berkaitan dengan penggunaan sistem penyuntingan genom CRISPR / Cascade 9 dan membincangkan peluang, isu etika dan arahan masa depan dalam bidang ini.

Kata kunci: CRISPR Cascade 9 RNA dipandu gen sistem yang mensasarkan genom mengedit kesan di luar sasaran.

Angka

Ilustrasi skematik CRISPR / Cascade…

Ilustrasi skematik sistem CRISPR / Cascade 9 dan proses penyuntingan genom. (A)…

Prinsip kerja asas…

Prinsip kerja asas teknologi penyuntingan sgRNA. Pembaikan rehat dua helai (DSB)…

Skema yang menggambarkan struktur sgRNA ...

Skema yang menggambarkan struktur dan mekanisme sgRNA pengiktirafan sasaran. (A)

Ilustrasi skematik prinsip…

Skema ilustrasi prinsip di sebalik penghasilan alel bersyarat. Gen ...

Gambaran keseluruhan potensi kejuruteraan genom…

Tinjauan hasil kejuruteraan genom yang berpotensi menggunakan nuklease khusus tapak. (Kiri) DNA untaian dua-untaian DNA


1986–2000

Urutan RNA boleh diedit di dalam sel

Prekursor RNA Messenger dari pelbagai organisma dapat diedit sebelum diterjemahkan ke dalam protein. Dalam proses ini, nukleotida yang tidak dikodekan dapat dimasukkan ke dalam lokasi tertentu dalam RNA, dan nukleotida yang dikodkan dapat dikeluarkan atau diganti. Penyuntingan RNA pertama kali ditemui dalam mitokondria protozoa kinetoplastid, di mana ia terbukti luas. [26] Sebagai contoh, sebilangan gen pengekodan protein mengekod kurang dari 50% nukleotida yang terdapat dalam mRNA yang sudah diterjemahkan dan matang. Kejadian penyuntingan RNA lain terdapat pada mamalia, tumbuhan, bakteria dan virus. Peristiwa penyuntingan terakhir ini melibatkan pengubahsuaian, penyisipan dan penghapusan nukleotida lebih sedikit daripada peristiwa dalam DNA kinetoplast, tetapi masih mempunyai kepentingan biologi yang tinggi untuk ekspresi gen dan peraturannya. [27]

Telomerase menggunakan templat RNA terbina dalam untuk mengekalkan hujung kromosom

Telomerase adalah enzim yang terdapat di semua inti eukariotik yang berfungsi untuk mengekalkan hujung DNA linier dalam kromosom linear nukleus eukariotik, melalui penambahan urutan terminal yang hilang dalam setiap putaran replikasi DNA. Sebelum telomerase dikenal pasti, aktivitinya diramalkan berdasarkan pemahaman molekul replikasi DNA, yang menunjukkan bahawa DNA polimerase yang diketahui pada masa itu tidak dapat meniru hujung 3 'kromosom linear, kerana tidak adanya helai templat . Telomerase was shown to be a ribonucleoprotein enzyme that contains an RNA component that serves as a template strand, and a protein component that has reverse transcriptase activity and adds nucleotides to the chromosome ends using the internal RNA template. [28]

Ribosomal RNA catalyzes peptide bond formation

For years, scientists had worked to identify which protein(s) within the ribosome were responsible for peptidyl transferase function during translation, because the covalent linking of amino acids represents one of the most central chemical reactions in all of biology. Careful biochemical studies showed that extensively-deproteinized large ribosomal subunits could still catalyze peptide bond formation, thereby implying that the sought-after activity might lie within ribosomal RNA rather than ribosomal proteins. Structural biologists, using X-ray crystallography, localized the peptidyl transferase center of the ribosome to a highly-conserved region of the large subunit ribosomal RNA (rRNA) that is located at the place within the ribosome where the amino-acid-bearing ends of tRNA bind, and where no proteins are present. These studies led to the conclusion that the ribosome is a ribozyme. The rRNA sequences that make up the ribosomal active site represent some of the most highly conserved sequences in the biological world. Together, these observations indicate that peptide bond formation catalyzed by RNA was a feature of the last common ancestor of all known forms of life. [29]

Combinatorial selection of RNA molecules enables in vitro evolution

Experimental methods were invented that allowed investigators to use large, diverse populations of RNA molecules to carry out in vitro molecular experiments that utilized powerful selective replication strategies used by geneticists, and which amount to evolution in the test tube. These experiments have been described using different names, the most common of which are "combinatorial selection", "in vitro selection", and SELEX (for Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment). These experiments have been used for isolating RNA molecules with a wide range of properties, from binding to particular proteins, to catalyzing particular reactions, to binding low molecular weight organic ligands. They have equal applicability to elucidating interactions and mechanisms that are known properties of naturally-occurring RNA molecules to isolating RNA molecules with biochemical properties that are not known in nature. In developing in vitro selection technology for RNA, laboratory systems for synthesizing complex populations of RNA molecules were established, and used in conjunction with the selection of molecules with user-specified biochemical activities, and in vitro schemes for RNA replication. These steps can be viewed as (a) mutation, (b) selection, and (c) replication. Together, then, these three processes enable in vitro molecular evolution. [30]


Wang, K. et al. The draft genome of a diploid cotton Gossypium raimondii. Nat. Genet. 44, 1098–1103 (2012).

Li, F. et al. Genome sequence of cultivated upland cotton (Gossypium hirsutum TM-1) provides insights into genome evolution. Nat. Bioteknologi. 33, 524–530 (2015).

Wang, M. et al. Reference genome sequences of two cultivated allotetraploid cottons, Gossypium hirsutum dan Gossypium barbadense. Nat. Genet. 51, 224–229 (2019).

Hu, Y. et al. Gossypium barbadense dan Gossypium hirsutum genomes provide insights into the origin and evolution of allotetraploid cotton. Nat. Genet. 51, 739–748 (2019).

Paterson, A. H. et al. Repeated polyploidization of Gosipium genomes and the evolution of spinnable cotton fibres. Alam semula jadi 492, 423–427 (2012).

Li, F. et al. Genome sequence of the cultivated cotton Gossypium arboreum. Nat. Genet. 46, 567–572 (2014).

Du, X. et al. Resequencing of 243 diploid cotton accessions based on an updated A genome identifies the genetic basis of key agronomic traits. Nat. Genet. 50, 796–802 (2018).

Parekh, M. J., Kumar, S., Fougat, R. S., Zala, H. N. & Pandit, R. J. Transcriptomic profiling of developing fiber in levant cotton (Gossypium herbaceum L.). Fungsi. Bersepadu. Genomik 18, 211–223 (2018).

Baralle, F. E. & Giudice, J. Alternative splicing as a regulator of development and tissue identity. Nat. Pendeta Mol. Sel Biol. 18, 437–451 (2017).

Laloum, T., Martín, G. & Duque, P. Alternative splicing control of abiotic stress responses. Trends Plant Sci. 23, 140–150 (2018).

Ushijima, T. et al. Light controls protein localization through phytochrome-mediated alternative promoter selection. Sel 171, 1316–1325 (2017).

Marquardt, S. et al. Functional consequences of splicing of the antisense transcript COOLAIR on FLC transcription. Mol. Sel 54, 156–165 (2014).

Yan, K. et al. Stress-induced alternative splicing provides a mechanism for the regulation of microRNA processing in Arabidopsis thaliana. Mol. Sel 48, 521–531 (2012).

Zhang, Y. et al. Integrative genome-wide analysis reveals HLP1, a novel RNA-binding protein, regulates plant flowering by targeting alternative polyadenylation. Sel Sel. 25, 864–876 (2015).

Yu, J. et al. CottonGen: a genomics, genetics and breeding database for cotton research. Asid Nukleik Res. 42, D1229–D1236 (2014).

Steijger, T. et al. Assessment of transcript reconstruction methods for RNA-seq. Nat. Kaedah 10, 1177–1184 (2013).

Sharon, D., Tilgner, H., Grubert, F. & Snyder, M. A single-molecule long-read survey of the human transcriptome. Nat. Bioteknologi. 31, 1009–1014 (2013).

Wang, B. et al. Unveiling the complexity of the maize transcriptome by single-molecule long-read sequencing. Nat. Komuniti. 7, 11708 (2016).

Abdel-Ghany, S. E. et al. A survey of the sorghum transcriptome using single-molecule long reads. Nat. Komuniti. 7, 11706 (2016).

Wang, M. et al. A global survey of alternative splicing in allopolyploid cotton: landscape, complexity and regulation. Phytol Baru. 217, 163–178 (2018).

Rhoads, A. & Au, K. F. Pacbio sequencing and its applications. Genomics Proteom. Bioinforma. 13, 278–289 (2015).

Au, K. F. et al. Characterization of the human ESC transcriptome by hybrid sequencing. Pro. Natl Acad. Sains. USA 110, E4821–E4830 (2013).

Batut, P. & Gingeras, T. R. RAMPAGE: promoter activity profiling by paired-end sequencing of 5′-complete cDNAs. dalam Current Protocols in Molecular Biology 25B.11.1–25B.11.16 (John Wiley & Sons, Inc., 2013). https://doi.org/10.1002/0471142727.mb25b11s104

Hoque, M. et al. Analysis of alternative cleavage and polyadenylation by 3′region extraction and deep sequencing. Nat. Kaedah 10, 133–139 (2013).

Boley, N. et al. Genome-guided transcript assembly by integrative analysis of RNA sequence data. Nat. Bioteknologi. 32, 341–346 (2014).

Niknafs, Y. S., Pandian, B., Iyer, H. K., Chinnaiyan, A. M. & Iyer, M. K. TACO produces robust multisample transcriptome assemblies from RNA-seq. Nat. Kaedah 14, 68–70 (2017).

Gordon, S. P. et al. Widespread polycistronic transcripts in fungi revealed by single-molecule mRNA sequencing. PLOS SATU 10, e0132628 (2015).

Wang, K., Huang, G. & Zhu, Y. Transposable elements play an important role during cotton genome evolution and fiber cell development. Sains. China Life Sci. 59, 112–121 (2016).

Frith, M. C. et al. A code for transcription initiation in mammalian genomes. Genom Res. 18, 1–12 (2007).

Morton, T. et al. Paired-end analysis of transcription start sites in Arabidopsis reveals plant-specific promoter signatures. Sel Tumbuhan 26, 2746–2760 (2014).

Leppek, K., Das, R. & Barna, M. Functional 5′UTR mRNA structures in eukaryotic translation regulation and how to find them. Nat. Pendeta Mol. Sel Biol. 19, 158–174 (2017).

Tokizawa, M. et al. Pengenalpastian Arabidopsis genic and non-genic promoters by paired-end sequencing of TSS tags. Tumbuhan J. 90, 587–605 (2017).

Mayr, C. Evolution and biological roles of alternative 3′UTRs. Trends Cell Biol. 26, 227–237 (2016).

Sherstnev, A. et al. Direct sequencing of Arabidopsis thaliana RNA reveals patterns of cleavage and polyadenylation. Nat. Struktur. Mol. Biol. 19, 845–852 (2012).

Fu, H. et al. Genome-wide dynamics of alternative polyadenylation in rice. Genom Res. 26, 1753–1760 (2016).

Graber, J. H., Cantor, C. R., Mohr, S. C. & Smith, T. F. In silico detection of control signals: mRNA 3′-end-processing sequences in diverse species. Pro. Natl Acad. Sains. USA 96, 14055–14060 (1999).

Wu, X. et al. Genome-wide landscape of polyadenylation in Arabidopsis provides evidence for extensive alternative polyadenylation. Pro. Natl Acad. Sains. USA 108, 12533–12538 (2011).

Li, W. et al. Alternative cleavage and polyadenylation in spermatogenesis connects chromatin regulation with post-transcriptional control. BMC Biol. 14, 6 (2016).

West, S. M. et al. Developmental dynamics of gene expression and alternative polyadenylation in the Caenorhabditis elegans germline. Genom Biol. 19, 8 (2018).

Bhate, M. P., Molnar, K. S., Goulian, M. & DeGrado, W. F. Signal transduction in histidine kinases: insights from new structures. Struktur 23, 981–994 (2015).

Ahmad, K. F., Engel, C. K. & Privé, G. G. Crystal structure of the BTB domain from PLZF. Pro. Natl Acad. Sains. USA 95, 12123–12128 (1998).

Li, Q., Xiao, G. & Zhu, Y.-X. Single-nucleotide resolution mapping of the Gossypium raimondii transcriptome reveals a new mechanism for alternative splicing of introns. Mol. Tanam 7, 829–840 (2014).

Li, Y. I., Sanchez-Pulido, L., Haerty, W. & Ponting, C. P. RBFOX and PTBP1 proteins regulate the alternative splicing of micro-exons in human brain transcripts. Genom Res. 25, 1–13 (2015).

García-Ríos, M. et al. Cloning of a polycistronic cDNA from tomato encoding gamma-glutamyl kinase and gamma-glutamyl phosphate reductase. Pro. Natl Acad. Sains. USA 94, 8249–8254 (1997).

Fukudome, A., Sun, D., Zhang, X. & Koiwa, H. Salt stress and CTD PHOSPHATASE-LIKE 4 mediate the switch between production of small nuclear RNAs and mRNAs. Sel Tumbuhan 29, 3214–3233 (2017).

Shearwin, K. E., Callen, B. P. & Egan, J. B. Transcriptional interference – a crash course. Tren Genet. 21, 339–345 (2005).

Davuluri, R. V., Suzuki, Y., Sugano, S., Plass, C. & Huang, T. H.-M. The functional consequences of alternative promoter use in mammalian genomes. Tren Genet. 24, 167–177 (2008).

Mejía-Guerra, M. K. et al. Core promoter plasticity between maize tissues and genotypes contrasts with predominance of sharp transcription initiation sites. Sel Tumbuhan 27, 3309–3320 (2015).

Jiang, J., Zhang, C. & Wang, X. A recently evolved isoform of the transcription factor BES1 promotes brassinosteroid signaling and development in Arabidopsis thaliana. Sel Tumbuhan 27, 361–374 (2015).

Ma, W. & Mayr, C. A membraneless organelle associated with the endoplasmic reticulum enables 3′UTR-mediated protein-protein interactions. Sel 175, 1492–1506 (2018).

Li, W. et al. EIN2-directed translational regulation of ethylene signaling in Arabidopsis. Sel 163, 670–683 (2015).

Hayashi, N. et al. Pengenalpastian Arabidopsis thaliana upstream open reading frames encoding peptide sequences that cause ribosomal arrest. Asid Nukleik Res. 45, 8844–8858 (2017).

Kurihara, Y. et al. Transcripts from downstream alternative transcription start sites evade uORF-mediated inhibition of gene expression in Arabidopsis. Pro. Natl Acad. Sains. USA 115, 7831–7836 (2018).

Ji, S. J. et al. Isolation and analyses of genes preferentially expressed during early cotton fiber development by subtractive PCR and cDNA array. Asid Nukleik Res. 31, 2534–2543 (2003).

Parkhomchuk, D. et al. Transcriptome analysis by strand-specific sequencing of complementary DNA. Asid Nukleik Res. 37, e123 (2009).

Zheng, D., Liu, X. & Tian, B. 3′READS+, a sensitive and accurate method for 3′ end sequencing of polyadenylated RNA. RNA 22, 1631–1639 (2016).

Moriya, Y., Itoh, M., Okuda, S., Yoshizawa, A. C. & Kanehisa, M. KAAS: an automatic genome annotation and pathway reconstruction server. Asid Nukleik Res. 35, W182–W185 (2007).

Szklarczyk, D. et al. The STRING database in 2017: quality-controlled protein-protein association networks, made broadly accessible. Asid Nukleik Res. 45, D362–D368 (2017).

Fort, A. & Fish, R. J. Deep cap analysis of gene expression (CAGE): genome-wide identification of promoters, quantification of their activity, and transcriptional network inference. Kaedah Mol. Biol. 1543, 111–126 (2017).

Sanfilippo, P., Wen, J. & Lai, E. C. Landscape and evolution of tissue-specific alternative polyadenylation across Drosophila spesies. Genom Biol. 18, 229 (2017).

Dai, X. & Zhao, P. X. psRNATarget: a plant small RNA target analysis server. Asid Nukleik Res. 39, W155–W159 (2011).

Waterhouse, A. et al. SWISS-MODEL: homology modelling of protein structures and complexes. Asid Nukleik Res. 46, W296–W303 (2018).

Huang, D. W., Sherman, B. T. & Lempicki, R. A. Bioinformatics enrichment tools: paths toward the comprehensive functional analysis of large gene lists. Asid Nukleik Res. 37, 1–13 (2009).

Lehti-Shiu, M. D. et al. Molecular evidence for functional divergence and decay of a transcription factor derived from whole-genome duplication in Arabidopsis thaliana. Fisiol Tumbuhan. 168, 1717–1734 (2015).

Ma, Z. et al. Resequencing a core collection of upland cotton identifies genomic variation and loci influencing fiber quality and yield. Nat. Genet. 50, 803–813 (2018).

Wang, M. et al. Asymmetric subgenome selection and cis-regulatory divergence during cotton domestication. Nat. Genet. 49, 579–587 (2017).

Li, T. et al. Genome-wide association study discovered candidate genes of Verticillium wilt resistance in upland cotton (Gossypium hirsutum L.). Bioteknologi Tumbuhan. J. 15, 1520–1532 (2017).

Sun, Z. et al. Genome-wide association study discovered genetic variation and candidate genes of fibre quality traits in Gossypium hirsutum L. Bioteknologi Tumbuhan. J. 15, 982–996 (2017).

Su, J. et al. Identification of favorable SNP alleles and candidate genes for traits related to early maturity via GWAS in upland cotton. BMC Genomics 17, 687 (2016).

Li, C., Fu, Y., Sun, R., Wang, Y. & Wang, Q. Single-locus and multi-locus genome-wide association studies in the genetic dissection of fiber quality traits in upland cotton (Gossypium hirsutum L.). Depan. Tumbuhan Sci. 9, 1083 (2018).


Pheromones protect us from viruses (9)

It may be a form of insanity that prevents theorists, atheists, and Communists from addressing the facts that have been detailed in the context of: Direct Observation of Protonation State Modulation in SARS-CoV-2 Main Protease upon Inhibitor Binding with Neutron Crystallography 3/23/21

…a class of agents called covalent peptidomimetic inhibitors that work by using strings of unnatural amino acids to bind to specific target proteins.

Thirteen miRNAs were identified by four independent studies to target SARS-CoV-2 specific genes, suggested to act by interfering with their cleavage and/or translation process. The studies selected also reported on viral and host miRNAs that targeted host genes, on the expression levels of miRNAs in biological specimens of COVID-19 patients, and on the impact of viral genome mutations on miRNA function. Also, miRNAs that regulate the expression levels of the ACE2 and TMPRSS2 proteins, which are critical for the virus entrance in the host cells, were reported.

They linked God’s Creation of anti-entropic virucidal energy and humidity to biophysically constrained viral latency via pH-dependent microRNA-mediated fixation of amino acid substitutions in the context of the patent for naturally occurring light-activated carbon fixation, which prevents the virus-driven degradation of messenger RNA and mutations that cause all diseases.

5. Repetitive elements or endogenous viral elements can be targeted with engineered Cas+gRNA systems in microbes, plants, animals, or human cells to reduce deleterious transposition or to aid in sequencing or other analytic genomic/transcriptomic/proteomic/diagnostic tools (in which nearly identical copies can be problematic).

This course helps clinicians understand how common viral infections can have long-term consequences carried out by the immune system. You will learn how lytic (actively replicating) and latent (quiescent) viral infections can raise the risk of autoimmune conditions, cancers, myocardial infarctions, and stroke. We will outline how to assess patient risk, and understand the current limitations of laboratory measures. You will understand how to intervene with specific nutrients and bioactives such as pro-resolving mediators, probiotics, and phytochemicals to modulate the immune response. You will learn from case examples what treatment implementation looks like in the real world, including challenges to managing postviral syndromes.

Photosynthesis links the creation of G protein-coupled receptor genes from the innate immune system to nutritional epigenetics and autophagy.

pH-taxis, chemotaxis, thermotaxis and phototaxis link microRNA biogenesis and microRNA flanking sequences from hydrogen energy-dependent changes in the microRNA/messenger RNA balance to autophagy.

Most pseudoscientists, Democrats, liberals, government subsidized academics, Communists, conspiracy theorists and other atheists, have not placed pH-taxis, chemotaxis, thermotaxis and phototaxis into the context of how sunlight and humidity link God’s Creation of energy-as-information to RNA interference across kingdoms. Their ignorance is exemplified in the corruption that former President Donald J. Trump revealed on 4/23/20 when he claimed that sunlight and humidity can weaken the coronavirus.

Where does he think the phytochemicals that modulate the immune response come from?

“…release of internalized miRNAs occurs in a pH-dependent manner…”

Also, God’s energy-dependent, (ATP-dependent) pH-dependent, Creation of RNA interference (#RNAi), which biophysically constrains viral latency, has been visualized.

New findings unveil that a ‘hidden’ layer of regulation by which the intrinsic dynamic ensemble of miRNA processing intermediates can direct the outcome of important biological processes in response to environmental and cellular stimuli in the absence of protein factors.

The so called hidden layer clearly involves the light-activated assembly of the microRNA-RNA-peptide nanocomplex, which links peptide synthesis at the origin of life (11/13/20) to the definition of biophysically constrained energy-dependent life.

Thanks to Guenther Witzany for placing this into the proper context of what life is via “What is Life?” 3/18/20 for comparison to speculation by stupid theorists that chemical metabolism could exist before the Creation of ATP and enzymes.

Do you believe that “Life’s biochemical networks could have formed spontaneously on Earth” (3/3/19) If so, stop reading my blog posts. You are too stupid to understand biologically-based cause and effect.

Stop SARS-CoV-2. Stop cancer. Stop all virus-driven diseases by stopping the stupid theorists. Alternatively, suffer unnecessarily and die prematurely due to ignorance, Communism and atheism.

…we summarize the literature on these master regulators in clinical settings from last three decades…

See my summary in the 10-part series: The eternal significance of microRNAs (4/10/18 until 5/16/18)

The virus-driven degradation of mRNA links the ‘darkhorse’ of cancer to all virus-driven diseases. microRNA biogenesis links the patent for naturally occurring light activated carbon fixation and protonated RNA interference to healthy longevity.

See also the series from 4/8/20 until 5/10/20 The microRNA-mediated future of humanity

…altered microRNA (miRNA) expression, may contribute to racial differences in breast cancer.

The link from microRNA-mediated sex differences in phenotypes extends to ethnic diversity outside the context of pseudoscientific nonsense. Social scientists, mathematicians, and theoretical physicists are not serious serious scientists unless they have linked quantum coherence to coherently organized biology.

…naturally arising cell-to-cell variation, sometimes described as stochastic fluctuation, is in fact coherently organized biology.

If the lives of black women, or the lives of any other men or women mattered to people like this, they would tell the truth and link God’s Creation of energy-as-information from Darwin’s studies of pigeons to ethnic differences in cancer via nutrient-dependent pheromone-controlled genetic processes of reproduction in species of soil bacteria to humans.

To link one biophysically constrained amino acid from Darwin’s “conditions of life” to all biodiversity on Earth via the physiology of reproduction in Biblical Genesis, see: Genomic diversity and evolution of the head crest in the rock pigeon 1/31/13

This identified one gene with genome-wide significance: EphB2, dan secara khusus cr SNP (Pgenome = 2.0×10 −8 ) (Fig. 2C,D). The cr allele has a predicted charge-changing arginine (basic) to cysteine (polar uncharged) transition in the catalytic loop of the intracellular tyrosine kinase domain of EphB2 (Fig. 2E). This amino acid position is invariant among other vertebrates suggesting strong purifying selection for conserved protein function. Notably, the same DLAARN to DLAACN motif change we observe in EphB2 is sufficient to abrogate kinase activity in human and mouse orthologs of the protein tyrosine kinase ZAP-70, and in both mammals and pigeons the mutant phenotypes are inherited recessively (19). Hence, the pigeon cr mutation probably abrogates kinase activity in EphB2 and disrupts downstream signal propagation, consistent with the high VAAST score for this gene. EphB2 is therefore a convincing candidate for the cr locus of classical pigeon genetics (5–7, 14).


12.9: RNA editing - Biology

Langganan J o VE diperlukan untuk melihat kandungan ini. Anda hanya dapat melihat 20 saat pertama.

Pemain video JoVE serasi dengan HTML5 dan Adobe Flash. Penyemak imbas lama yang tidak menyokong HTML5 dan codec video H.264 masih akan menggunakan pemain video berasaskan Flash. Kami mengesyorkan memuat turun versi terbaru Flash di sini, tetapi kami menyokong semua versi 10 ke atas.

Sekiranya itu tidak membantu, beritahu kami.

The CRISPR-Cas9 system is a DNA editing tool that stands for, Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats and CRISPR associated protein 9.

First observed in bacteria, CRISPR-Cas9 is a means of defense against viruses. As foreign viral DNA enters a bacterium, it's processed into smaller fragments, which may be inserted into a region of the bacterial genome called a CRISPR Locus.

When the region is transcribed, the product associates with smaller RNAs called tracrRNAs which may help to orient both the Cas9 protein and RNAse to the molecule. The latter of which cleaves the transcript.

The end result is several complexes each consisting of a Cas9 protein, tracrRNA and a crRNA derived from DNA in the Locus. The CRISPR RNA in these structures recognizes and guides Cas9 to viral DNA which is then cleaved and destroyed.

Scientists harness CRISPR-Cas9 by synthesizing individual RNA molecules that mimic tracrRNA and CRISPR RNA which can target a gene of interest. For example when two such guide RNAs are introduced into cells with Cas9 and both target the same gene, a sequence can be excised.

Once this target region is removed the cut ends are reconnected and the effects on the cells are observed.

Thus the CRISPR-Cas9 system is modified from a bacterial mechanism. And can be employed for an array of gene editing techniques.

15.12: CRISPR

Genome editing technologies allow scientists to modify an organism&rsquos DNA via the addition, removal, or rearrangement of genetic material at specific genomic locations. These types of techniques could potentially be used to cure genetic disorders such as hemophilia and sickle cell anemia. One popular and widely used DNA-editing research tool that could lead to safe and effective cures for genetic disorders is the CRISPR-Cas9 system. CRISPR-Cas9 stands for Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats and CRISPR-associated protein 9. A basic CRISPR-Cas9 system consists of a Cas9 endonuclease and a small RNA that guides Cas9 to the target DNA.

Asal

CRISPR sequences were first observed in bacteria and later identified in archaea. Researchers discovered that the CRISPR-Cas9 system serves an adaptive immune defense against invading viruses. Many bacteria and most archaea capture short sequences of the viral DNA to create a library of virus DNA segments, or CRISPR arrays. When the prokaryotes are re-exposed to the same virus or class of viruses, CRISPR arrays are used to transcribe small RNA segments that help recognize viral invaders and subsequently destroy viral DNA with Cas9 or a similar endonuclease.

Using CRISPR-Cas9 Technology

CRISPR-Cas9 is commonly used in the laboratory to remove DNA and insert a new DNA sequence in its place. To achieve this, researchers must first create a small fragment of RNA called the guide RNA, with a short sequence called the guide sequence that binds to a specific target sequence on genomic DNA. The guide RNA can also associate with Cas9 (or other endonucleases like Cpf1). The guide RNA and Cas9 protein are administered to a cell of interest where the guide RNA identifies the target DNA sequence and Cas9 cleaves it.

The cell&rsquos machinery then repairs the broken strands by inserting or deleting random nucleotides, rendering the target gene inactive. Alternatively, a customized DNA sequence may be introduced into the cell along with the guide RNA and Cas9, that serves as a template for the repair machinery and replaces the excised sequence. This is a highly effective way for researchers to &ldquoknock out&rdquo a gene to study its effects or replace a mutated gene with a normal copy in hopes of curing a disease.

Ethical and Feasibility Considerations in Humans

As a result of the significant gene modification capabilities of the CRISPR-Cas9 system, there has been great debate over its use, especially in regards to embryo editing. A Chinese scientist recently claimed to have created genome-edited babies using CRISPR technology to disable a gene involved in HIV infection. This led to a global outcry from scientists concerned about the ethical and safety considerations of the procedure. Many have called the move premature, and others have expressed concerns over off-target genomic effects. While the number of possible biotech applications for the CRISPR-Cas9 system is numerous, it is important to consider future challenges that may arise as a result of its use.

Thurtle‐Schmidt, Deborah M., and Te‐Wen Lo. &ldquoMolecular Biology at the Cutting Edge: A Review on CRISPR/CAS9 Gene Editing for Undergraduates.&rdquo Biochemistry and Molecular Biology Education 46, tidak. 2 (2018): 195&ndash205. [Sumber]

Lander, Eric S. &ldquoThe Heroes of CRISPR.&rdquo Sel 164, no. 1 (January 14, 2016): 18&ndash28. [Sumber]


Tonton videonya: Triplet Basa Nitrogen DNA Template, DNA Non Template, dan mRNA pada Sintesis Protein (Januari 2022).