Maklumat

Bolehkah protein yang jatuh di bawah ambang mencetuskan tindak balas yang lain?


Adakah kemungkinan penurunan kepekatan protein di bawah ambang mencetuskan pembebasan atau pengeluaran protein lain?


Sudah tentu, itu mungkin. Saya akan memberikan contoh mudah. Sekiranya protein anda (X) adalah penghambat protein lain (Y), maka apabila X jatuh, Y akan naik. Ini sebenarnya tidak akan "dibatasi".

Terdapat banyak mekanisme yang boleh menyebabkan ambang batas yang merangkumi kerjasama (dalam tindakan X) dan maklum balas positif. Bagaimana mekanisme ini berfungsi sama sekali akan menjadi persoalan yang berbeza. (Pembacaan pantas adalah artikel wikipedia ini).


Cadangan untuk pemindahan plasma dan platelet

Petunjuk utama untuk transfusi plasma adalah untuk memperbaiki kekurangan faktor pembekuan, yang mana kepekatan tertentu tidak tersedia, pada pesakit dengan pendarahan aktif. Produk yang ada adalah: plasma beku segar (FFP), plasma yang telah mengalami ketidakaktifan virus dengan rawatan pelarut / pencuci (S / D FFP), dengan metilena biru (MB FFP) atau dengan psoralens, khususnya amotosalen (S59) dan cahaya 1 teknologi inaktivasi menggunakan riboflavin akan segera tersedia 2.

Plasma Beku Segar

Definisi

Komponen darah yang disiapkan dari darah penuh atau dikumpulkan dengan apheresis, dibekukan dalam had masa dan pada suhu seperti untuk memelihara faktor pembekuan labil secukupnya 3 & # x02013 5.

FFP disediakan dari unit darah penuh dan yang berasal dari apheresis setara secara terapi dari segi hemostasis dan kesan sampingan (Gred cadangan: 1A) 4 .

Hartanah

FFP mengandungi tahap normal faktor pembekuan stabil, albumin dan imunoglobulin. Ia mengandungi sekurang-kurangnya 70% faktor pembekuan asli VIII dan sekurang-kurangnya jumlah yang serupa dengan faktor pembekuan labil yang lain dan perencat semula jadi pembekuan 1, 3 & # x02013 5.

FFP untuk penggunaan klinikal tidak boleh mengandungi antibodi anti-eritrosit yang tidak teratur secara klinikal. Untuk meningkatkan keselamatannya, FFP dapat dikuarantin untuk jangka waktu minimum 4 bulan.

Perbezaan individu fisiologi dalam kepekatan protein plasma bermaksud bahawa definisi generik FFP diterapkan pada produk yang berbeza dari segi kualiti.

Plasma pelarut / pencuci

S / D FFP adalah produk farmaseutikal, yang diperoleh dari kumpulan kira-kira 1,000 unit FFP, dengan ciri berikut 2, 6 & # x02013 34:

- standardisasi kumpulan tinggi setiap kumpulan

- menyatakan kepekatan / aktiviti protein aktif secara biologi

- mengurangkan risiko imunologi yang berkaitan dengan kehadiran antibodi, sel (atau serpihannya)

- ketidakaktifan sebahagian besar patogen yang berpotensi menular

- penghapusan selektif unit yang tercemar oleh virus hepatitis A atau parvovirus B19.

Plasma yang dirawat biru metilena

Metilena biru (MB) adalah pewarna fenotiazin dengan kesan virucidal 2, 35 & # x02013 40. MB FFP bukan produk farmaseutikal, tetapi berasal dari penggunaan kaedah inaktivasi yang digunakan untuk satu unit plasma.

Kandungan protein aktif secara biologi produk ini tidak dapat diseragamkan, oleh itu kebolehubahan biologi unit tetap tinggi.

Potensi penurunan risiko infektif sisa adalah sama dengan risiko S / D FFP.

Terdapat beberapa bukti dalam literatur bahawa kaedah inaktivasi virus menyebabkan penurunan kepekatan beberapa faktor pembekuan dan penghambat pembekuan 33 & # x02013 40.

Petunjuk

Transfusi FFP ditunjukkan dalam situasi berikut (Jadual I):

Pembetulan kekurangan kongenital faktor pembekuan, yang mana tidak ada kepekatan tertentu, atau kekurangan yang diperolehi dari beberapa faktor pembekuan, apabila PT atau aPTT, dinyatakan sebagai nisbah, adalah & # x0003e 1.5, dalam keadaan yang disenaraikan di bawah 1, 3 , 4, 41 & # x02013 67:

Pendarahan berterusan pada pesakit dengan penyakit hati (Gred cadangan: 1C +) 41 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 67.

Pencegahan pendarahan, sekiranya berlaku pembedahan atau prosedur invasif, pada pesakit dengan penyakit hati (Gred cadangan: 2C) 41 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 67 & # x02013 70.

Pesakit dirawat dengan antagonis vitamin K, apabila terdapat pendarahan utama atau pendarahan intrakranial atau sebagai persediaan untuk pembedahan yang tidak dapat ditunda (Gred cadangan: 1C +) 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 67, jika pekatan kompleks prothrombin, rawatan pilihan pertama, tidak tersedia 55, 59 & # x02013 65.

Pesakit dengan pembekuan intravaskular akut (DIC) dan pendarahan aktif, berkaitan dengan pembetulan penyebab yang mendasari (Gred cadangan: 1C +) 41 & # x02013 51, 53, 54, 56 & # x02013 58, 67.

Pembetulan pendarahan mikrovaskular pada pesakit yang menjalani transfusi besar-besaran. Sekiranya PT dan aPTT tidak dapat diperoleh dalam jangka waktu yang wajar, FFP dapat ditransfusikan dalam hal apapun dalam usaha menghentikan pendarahan (Gred cadangan: 1C +) 41 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 66, 67.

Kekurangan faktor pembekuan tunggal, jika tidak terdapat kepekatan khusus (contohnya, kekurangan faktor V), sekiranya terdapat pendarahan aktif atau untuk mengelakkan pendarahan, sekiranya berlaku pembedahan atau prosedur invasif (Gred cadangan: 1C +) 41 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 67.

Rawatan aferetik mikroangiopati trombotik (purpura trombositopenik trombotik, sindrom haemolyticuraemic, anemia hemolitik peningkatan enzim hati dan sindrom platelet rendah [HELLP]), sebagai cecair pengganti (Gred cadangan: 1A) 41 & # x02013 52, 56 & # x02013 58, 67.

Pengambilan semula darah keseluruhan untuk transfusi pertukaran (Gred cadangan: 2C) 71 , 72 .

Angioedema keturunan kerana kekurangan esterase, dengan ketiadaan inaktivator C1 derivatif plasma tertentu (Gred cadangan: 2C +) 50 .

Jadual I

Petunjuk untuk pemindahan plasma

Keadaan klinikalGoR
1. Pembetulan kekurangan faktor pembekuan kongenital atau yang diperoleh (yang tidak terdapat kepekatan tertentu), apabila nisbah PT atau aPTT adalah & # x0003e1.5:
& # x02003 & # x02003- Penyakit hati:
& # x02003 & # x02003 & # x02003 & # x02003- pendarahan aktifng1C +
& # x02003 & # x02003 & # x02003 & # x02003- pencegahan pendarahan sekiranya berlaku pembedahan atau prosedur invasif2C
& # x02003 & # x02003- Semasa rawatan dengan antagonis vitamin K (jika kompleks prothrombin, yang merupakan rawatan pilihan pertama, tidak tersedia):1C +
& # x02003 & # x02003 & # x02003 & # x02003- sekiranya terdapat pendarahan utama atau intrakranial
& # x02003 & # x02003 & # x02003 & # x02003- sebagai persediaan untuk pembedahan daripada yang tidak dapat ditangguhkan
& # x02003 & # x02003- Pembekuan intravaskular disebarkan akut dengan pendarahan aktif, berkaitan dengan pembetulan penyebab yang mendasari1C +
& # x02003 & # x02003- Pendarahan mikrovaskular semasa transfusi besar-besaran (& # x0003e1 jumlah darah), bahkan sebelum keputusan PT dan aPTT1C +
& # x02003 & # x02003- Kekurangan faktor pembekuan tunggal, sekiranya tidak terdapat kepekatan khusus (mis. FV), sekiranya terdapat pendarahan aktif atau untuk mengelakkan pendarahan semasa prosedur invasif1C +
2. Rawatan apheretik terhadap mikroangiopati trombotik (purpura trombositopenik trombotik, sindrom hemolitik-uraemik, sindrom HELLP), sebagai cecair pengganti1A
3. Pengambilan semula darah keseluruhan untuk pertukaran darah2C
4. Angioedema keturunan sekiranya penghambat C1-esterase tidak tersedia2C +

Legenda: GoR: Gred cadangan BANTUAN: anemia hemolitik peningkatan enzim hati dan bilangan platelet rendah

Petunjuk pada neonatus

Masa pembekuan di neonatus, yang rata-rata lebih lama daripada pada orang dewasa, tidak semestinya berkaitan dengan risiko pendarahan 71 & # x02013 74. Ini lebih banyak berlaku pada neonatus pramatang, oleh itu, hasil ujian pembekuan yang tidak normal, jika tidak ada gejala atau risiko pendarahan, bukan merupakan petunjuk untuk transfusi FFP.

FFP ditunjukkan untuk pendarahan yang disebabkan oleh kekurangan vitamin K dan pendarahan (atau risiko pendarahan tinggi) kerana DIC. Ini juga ditunjukkan untuk rawatan kekurangan kongenital faktor pembekuan tunggal, apabila konsentrat spesifik tidak tersedia (Gred cadangan: 2C) 4, 71 & # x02013 74.

Sebaiknya FFP adalah & # x02018safe & # x02019, dalam arti telah mengalami ketidakaktifan virus atau dikuarantin.

Untuk keterangan lebih lanjut, rujuk cadangan bersama dari Persatuan Neonatologi Itali dan SIMTI 72.

Kaedah penggunaan

FFP mesti dicairkan antara 30 & # x000b0C dan 37 & # x000b0C di tempat mandi air di bawah pergolakan berterusan atau dengan sistem lain yang dapat memastikan suhu terkawal. Plasma mesti ditransfusikan secepat mungkin setelah pencairan, tetapi dalam 24 jam, jika disimpan pada suhu 4 & # x000b1 2 & # x000b0C 4, 5.

Rujuk pada lembaran ringkasan produk untuk maklumat mengenai masa maksimum antara penyelesaian pencairan S / D FFP dan memulakan pemindahannya.

FFP tidak boleh dibekukan semula setelah dicairkan (Gred cadangan: 1C +) 4 .

Rejimen dos

Dos terapi FFP yang disyorkan ialah 10 & # x0201315 mL / kg berat badan 1, 4, 43, 44, 47. Walau bagaimanapun, dos FFP bergantung pada keadaan klinikal dan parameter makmal (Gred cadangan: 1C +) 1, 4, 43, 44, 47, 50, yang mungkin membenarkan pemberian dos yang lebih tinggi 75 & # x02013 77.

Keserasian ABO / RhD

Plasma yang digunakan mestilah serasi dengan ABO dengan penerima (Jadual II) (Gred cadangan: 1C +) 3 , 4 , 50 .

Jadual II

Terapi transfusi dengan FFP: pemilihan fenotip ABO unit untuk transfusi

Fenotip ABO penerimaFenotip ABO unit untuk transfusi (mengikut urutan pilihan)
OO, A, B, AB
AA, AB
BB, AB
ABAB

FFP tidak perlu menjadi profilaksis anti-D yang serasi dengan Rh tidak diperlukan pada penerima Rh D-negatif FFP Rh D-positif (Gred cadangan: 1C +) 3 , 4 .

Petunjuk yang tidak sesuai

- Pengembangan isipadu peredaran darah

- pembetulan kekurangan imun

- pembetulan kekurangan kongenital atau kekurangan faktor pembekuan jika tidak ada pendarahan, atau pembetulan gangguan hemostasis pada pesakit dengan penyakit hati kronik yang tidak berdarah (Gred cadangan: 1C +) 4, 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 68, 69, 71 & # x02013 73, 77 & # x02013 80.

Kontraindikasi

Kontraindikasi mutlak terhadap penggunaan FFP didokumentasikan intoleransi terhadap plasma atau komponennya dan kekurangan kongenital imunoglobulin A (IgA) dengan adanya antibodi anti-IgA 4.

Kontraindikasi relatif adalah kegagalan jantung dan edema paru.

Indeks pemantauan untuk audit klinikal

- Penggunaan terapi transfusi dengan FFP dalam situasi berikut:

pengembangan isipadu peredaran darah

pembetulan kekurangan imun

pembetulan kekurangan kongenital atau diperolehi faktor pembekuan sekiranya tidak ada pendarahan, atau pembetulan gangguan hemostasis pada pesakit dengan penyakit hati kronik yang tidak berdarah.

- Penilaian kesesuaian dos FFP.

Reaksi buruk terhadap pemindahan FFP

ringan (urtikaria): berlaku pada 1% pesakit

teruk dan anafilaksis: berlaku dengan kekerapan kurang dari 1 kes setiap 100,000 pemindahan.

- Kecederaan paru-paru akut yang berkaitan dengan transfusi (TRALI) 81 & # x02013 85: edema paru bukan kardiogenik berkembang dalam masa 4 & # x020136 jam dari pemindahan FFP. Komplikasi ini dapat dielakkan dengan menggunakan plasma dari penderma lelaki yang tidak pernah ditransfusikan dan dari penderma wanita nulliparous yang tidak pernah ditransfusikan, atau dengan menggunakan S / D FFP.

- Reaksi demam 3, 4, 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 71 & # x02013 73: ini berlaku pada kurang dari 1% pesakit yang ditransfusikan dengan FFP dan sehingga 10% pesakit menjalani pertukaran plasma.

- Ketoksikan sitrat 3, 4, 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 71 & # x02013 73: ini boleh berlaku selepas pemindahan plasma dalam jumlah yang besar dan sangat penting pada neonatus dan pada pesakit dengan penyakit hati.

- Penularan jangkitan 3, 4, 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 71 & # x02013 73: proses pembekuan mengaktifkan pencemaran dan pertumbuhan bakteria bakteria, dengan pembebasan endotoksin, sebelum pembekuan sangat mustahil. Walau bagaimanapun, masih ada risiko, walaupun minimum, penularan jangkitan virus atau jangkitan disebabkan oleh patogen lain yang tidak diketahui atau belum diuji.

- Penyakit Graft-versus-host (GvHD) 4: tidak ada kes GvHD yang berkaitan dengan FFP yang pernah dilaporkan. Pembekuan menyebabkan lisis limfosit, jadi penyinaran plasma tidak diperlukan.

- Lebihan peredaran darah 3, 4, 42 & # x02013 51, 56 & # x02013 58, 71 & # x02013 73: ini boleh berlaku, terutamanya pada pesakit dengan kegagalan buah pinggang atau kardiorespirasi.

- Inhibitor terhadap kekurangan protein 86: ini dapat berkembang setelah transfusi plasma pada pesakit dengan kekurangan faktor pembekuan yang teruk.

Rujukan


PENGENALAN

Semasa mitosis, mikrotubulus spindle menyelidiki ruang tiga dimensi sel dalam proses "cari dan tangkap" yang penting untuk interaksi mikrotubulus yang cekap ditambah dengan korteks sel dan kinetochores (dikaji dalam Kline-Smith dan Walczak, 2004) . Peningkatan dinamik mikrotubulus pada permulaan mitosis dipercayai dapat memudahkan orientasi tepat waktu dan penjajaran kromosom dalam metafasa. Perubahan lebih lanjut dalam dinamik mikrotubulus juga telah diusulkan untuk menyumbang pada kekuatan yang memisahkan kromosom dan memanjangkan gelendong mitotik dalam anafase (ditinjau di Scholey et al., 2003). Penghambatan dinamika mikrotubulus oleh mutasi pada protein yang berkait dengan mikrotubulus ditambah hujung atau dengan penambahan ubat-ubatan menyebabkan kegagalan dalam penjajaran dan pemisahan kromosom (Berlin et al., 1990 Dujardin et al., 1998 Gruss et al., 2002 Maiato et al., 2002 Rogers et al., 2002 Andrews et al., 2004 Cassimeris dan Morabito, 2004 Kline-Smith dan Walczak, 2004 Vaughan, 2004). Oleh itu, dengan betul mengatur sifat dinamik mikrotubulus sangat penting untuk memastikan pemisahan kromosom yang tepat dalam mitosis.

Walaupun perubahan dalam dinamik mikrotubulus semasa mitosis didokumentasikan dengan baik, mekanisme yang mengawal tingkah laku mikrotubulus kurang jelas. Sejumlah protein yang berkaitan dengan mikrotubulus serta faktor larut yang berasal dari kromosom telah terlibat dalam mengatur dinamika mikrotubulus, menunjukkan bahawa rangkaian protein yang kompleks mengendalikan mikrotubulus semasa mitosis. Hujung tambah mikrotubulus adalah laman pengikat penting bagi protein yang mengatur mikrotubulus. Keluarga protein TIP yang disebut telah terbukti mengatur dinamika mikrotubulus dalam sejumlah sistem dan merangkumi EB1, CLIP-170, CLASP, dynein, LIS1, subunit dynactin p150 terpaku, dan polyposis adenomatous coli (APC dikaji di Karsenti dan Vernos, 2001 Kline-Smith dan Walczak, 2004 Vaughan, 2004). Selain berkongsi lokalisasi umum di hujung mikrotubulus, protein ini biasanya memodulasi peralihan antara pertumbuhan mikrotubulus dan pengecutan. Salah satu TIP + yang paling dicirikan adalah EB1, yang fungsinya sebagai faktor "anti-jeda" dijaga dengan baik. Penghambatan EB1 dalam sejumlah sistem menghasilkan mikrotubulus nondynamic yang menghabiskan sebagian besar waktu dalam keadaan berhenti (Tirnauer et al.,1999, 2002b Rogers et al., 2002). Eksperimen imunodepletion EB1 di Xenopus ekstrak menghasilkan pengurangan dramatik dalam panjang mikrotubulus. Begitu juga, penipisan RNAi EB1 di Drosophila embrio menyebabkan kestabilan mikrotubulus berkurang dan gangguan spindle mitotik (Rogers et al., 2002 Tirnauer et al., 2002b). Sebaliknya, protein + TIP lain, termasuk LIS1, telah dilaporkan menekan dinamika mikrotubulus secara in vitro dengan mengurangkan bencana penghambatan LIS1 yang mengakibatkan cacat lampiran kinetokore-mikrotubulus (Faulkner et al., 2000 Coquelle et al., 2002 Tai et al., 2002). Oleh itu, kemungkinan keseimbangan aktiviti di mikrotubulus plus berakhir mengoptimumkan proses pencarian dan penangkapan, memastikan mikrotubulus plus berakhir dengan berkesan menemukan laman lampiran mereka.

APC secara langsung dapat berinteraksi dengan mikrotubulus melalui wilayah dasarnya atau secara tidak langsung dapat berinteraksi dengan mikrotubulus melalui hubungannya dengan protein yang berkaitan dengan kinesin II, KAP3a, atau dengan + TIP, EB1 (Nathke et al., 1996 Mimori-Kiyosue et al.,2000a, 2000b Mogensen et al., 2002 Etienne-Manneville dan Hall, 2003 Wen et al., 2004). Dengan kajian pengikatan ragi dua hibrid dan in vitro, EB1 telah terbukti berinteraksi dengan terminal karboks APC, sedangkan KAP3a berinteraksi dengan domain armadillo terminal amino di APC (Su et al., 1995 Jimbo et al., 2002). Pengikatan terminal karboksi APC ke EB1 meningkatkan kemampuan EB1 untuk mengikat sepanjang mikrotubulus in vitro-polimerisasi, dengan alasan bahawa APC boleh berfungsi untuk "memuat" EB1 pada mikrotubulus plus hujung (Nakamura et al., 2001). Potensi hubungan fisiologi antara APC dan EB1 disokong oleh karya baru-baru ini yang menunjukkan bahawa interaksi antara kedua protein ini penting untuk pembentukan mikrotubulus stabil dalam fibroblas bermigrasi (Wen et al., 2004). Penemuan ini meningkatkan kemungkinan bahawa APC dapat mengatur aktiviti + TIP, seperti EB1, sebagai tindak balas terhadap isyarat yang berkaitan dengan peristiwa sel terpolarisasi.

Menariknya, APC juga terlibat dalam fungsi spindle mitotik yang betul. APC melokalisasikan hujung kinetokore-mikrotubulus semasa mitosis, menunjukkan bahawa ia juga boleh mempengaruhi kestabilan mikroubub atau lampiran dalam konteks ini. Selaras dengan hipotesis ini, sel ES yang kekurangan APC jenis liar dan sel yang menyatakan bentuk APC mutan rentan terhadap kesalahan pemisahan kromosom (Fodde et al., 2001 Kaplan et al., 2001 Hijau dan Kaplan, 2003 Dikovskaya et al., 2004 Louie et al., 2004). Kerja terbaru menunjukkan bahawa pengasingan kromosom dan kesalahan kedudukan gelendong mungkin disebabkan oleh kecacatan lampiran mikrotubulus ditambah pada sel yang menyatakan bentuk mutan APC (Green dan Kaplan, 2003 Tighe et al., 2004).Ada kemungkinan bahawa mutan APC mempengaruhi kemampuan mikrotubulus untuk mencari lokasi pengikatannya, dengan mengganggu dinamika mikrotubulus, atau sebagai alternatif dengan mempengaruhi integriti laman pengikat. EB1 dan APC juga terlibat dalam kedudukan gelendong di eukariota yang lebih tinggi (Lu et al., 2001 McCartney et al., 2001 Yamashita et al., 2003). Oleh itu, adalah wajar untuk membuat hipotesis bahawa EB1 dan APC dapat bekerjasama pada mikrotubulus dan hujung untuk mengatur dinamika mikrotubulus semasa mitosis.

Sebelumnya kami menunjukkan bahawa bentuk APC yang dipotong (APC 1-1450), mirip dengan protein yang dinyatakan dalam banyak kanker kolorektal, secara dominan membahayakan lampiran mikrotubulus plus pada akhir mitosis, mengakibatkan gelendong mitotik terganggu dan kesalahan dalam pemisahan kromosom. Dalam artikel ini kita menyiasat asas molekul yang mendasari fenotip dominan ini. Kami mendapati bahawa penghambatan EB1 atau APC menyebabkan kecacatan sangat serupa dengan yang diperhatikan pada sel yang menyatakan APC 1–1450. Menghambat EB1 dan APC tidak mempunyai kesan tambahan dengan alasan bahawa protein ini berfungsi bersama untuk mengatur spindle mitotik. Kami mendapati bahawa penghambatan APC atau EB1 menyebabkan kecacatan penjajaran kromosom tetapi tidak ada penangkapan mitotik sebaliknya, penghambatan TIPS lain mengakibatkan kedua-dua kecacatan penjajaran kromosom dan penangkapan mitotik yang kuat. Selaras dengan hubungan fungsional antara APC dan EB1, kami mendapati bahawa APC 1-1450 membentuk hetero-oligomer dengan APC endogen dan bahawa pembentukan kompleks ini menghalang hubungan EB1 dengan APC. Pencitraan langsung komet EB1-GFP menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam frekuensi berhenti sejenak dalam sel yang menyatakan APC 1–1450. Hasil bersama ini memberikan bukti yang meyakinkan bahawa APC mengatur gelendong mitotik melalui EB1, mutasi APC yang memulakan tumor dapat mendorong kesalahan penyelarasan kromosom sambil tetap membiarkan pembelahan sel, sehingga berpotensi menyumbang kepada ketidakstabilan kromosom dalam sel tumor.


Pengenalan

Kepelbagaian dan kerumitan dalam proteom selular mendorong pengembangan protokol yang luas untuk meningkatkan analisis dengan spektrometri massa (MS). Dalam eksperimen tradisional dari bawah ke atas, kaedah ini dioptimumkan untuk meningkatkan kedalaman liputan proteom melalui penghasilan keadaan yang baik untuk pencernaan proteolitik dan pemulihan sampel (León et al, 2013 Tanca et al, 2013) dan telah menyebabkan pemetaan proteome hampir lengkap dari pelbagai barisan sel mamalia (Beck et al, 2011 Moghaddas Gholami et al, 2013 Branca et al, 2014). Walau bagaimanapun, prestasi dalam eksperimen proteomik menurun dengan ketara apabila jumlah protein terhad, kerana ketidakcekapan yang berkaitan dengan pemprosesan sampel dan kepekaan instrumen. Walaupun inovasi terbaru dalam instrumentasi spektrometri massa telah mempercepat kepantasan dan kepekaan analisis proteome (Hebert et al, 2014), penambahbaikan selanjutnya dapat diperoleh dengan menekankan pengoptimuman, penyederhanaan, dan miniaturisasi penyediaan sampel.

Untuk meningkatkan pemprosesan sampel, agen yang membantu dalam gangguan sel dan pelarutan seperti detergen dan chaotropes sering digunakan. Bermasalah, sebilangan besar aditif ini tidak sesuai dengan analisis proteolisis dan MS dan dengan itu memerlukan penyingkiran menggunakan ultrafiltrasi (Wisniewski et al, 2009) dan berasaskan manik (Bereman et al, 2011 Hengel et al, 2012) atau pendekatan pemendakan, yang masing-masing meningkatkan pengendalian dan kehilangan bahan seterusnya. Semasa proteomik berasaskan MS bergerak ke arah analisis sampel yang jarang dan terhad kuantiti, aliran kerja ultrasensitif yang menghilangkan kerugian ini sangat penting (Altelaar & Heck, 2012). Ini menyebabkan pengembangan metodologi yang meminimumkan pengendalian dan mendorong pemulihan sampel yang tinggi (Ethier & Hou, 2006 Umar et al, 2007 Waanders et al, 2009 Wang et al, 2010 Di Palma et al, 2011 Wisniewski et al, 2011a Matahari et al, 2013 Erde et al, 2014 Kulak et al, 2014 Zougman et al, 2014). Walau bagaimanapun, protokol ini mempunyai fleksibiliti terhad kerana beberapa kekurangan, termasuk ketidaksesuaian reagen (deterjen, chaotropes, garam), penggunaan alternatif pencuci yang diperlukan (mis., Amphipols), sekatan yang berkaitan dengan jumlah sampel mutlak, throughput, dan pengendalian berlebihan. Selepas itu, aliran kerja ini biasanya terhad kepada pemprosesan kuantiti bahan mutlak & gt 1 μg atau mencapai liputan proteom yang berkurang (

2.000 jumlah protein) semasa memeriksa jumlah protein sub-mikrogram. Kekurangan ini sebahagian besarnya telah menghalang penggunaan proteomik dalam aplikasi di mana kebolehulangan, kepekaan, dan hasil yang tinggi diperlukan, seperti dalam kajian klinikal atau pemeriksaan populasi.

Pengembangan urutan generasi seterusnya yang pesat telah mendorong pengembangan kaedah yang sesuai dengan persiapan perpustakaan genom throughput tinggi yang sangat difasilitasi oleh penerapan manik paramagnetik dalam platform manual dan robotik (DeAngelis et al, 1995 Wilkening et al, 2013). Walau bagaimanapun, penggunaan manik paramagnetik tidak biasa dalam proteomik umum, walaupun telah digunakan dalam aplikasi khusus untuk penggabungan kovalen atau pemurnian afinitas protein, proteolisis tidak bergerak (Fan et al, 2014), dan untuk pengayaan peptida yang diubah suai selepas terjemahan (Yeh et al, 2012 Zeng et al, 2012). Teknologi terkini berdasarkan zarah nanodiamond telah menggambarkan penipisan bahan pencemar dan peningkatan proteomik khusus petak (Chen et al, 2006 Pham et al, 2013). Mengembangkan perkembangan teknologi yang dipelopori oleh imobilisasi berbalik fasa pepejal (SPRI) (DeAngelis et al, 1995) dan teknologi nanodiamond (Chen et al, 2006), dan dengan tujuan untuk meningkatkan dan mempermudah pemprosesan sampel proteomik generik, kami telah mengembangkan SP3. SP3 adalah aliran kerja proteomik satu tiub baru yang menyediakan pengikatan protein dan peptida yang tidak berat sebelah yang cekap, yang memungkinkan penyelesaian aliran kerja proteomik yang cepat dan efisien dengan cara yang tinggi.

Dalam kajian ini, SP3 diterapkan pada berbagai aplikasi proteomik konvensional dan ultrasensitif. Berdasarkan pemerhatian bahawa SP3 menyediakan platform yang ditingkatkan untuk menangani jumlah sub-mikrogram bahan yang ditentukan dari sel HeLa yang memprofilkan proteom mendalam, kami menerapkan SP3 untuk memeriksa perkembangan embrio menggunakan Drosophila embrio. Walaupun terdapat banyak data ekspresi gen untuk Drosophila, dinamika proteome semasa pembangunan menjadi tumpuan kajian yang agak sedikit (Carmena, 2009). Dengan pendekatan berasaskan SP3, proteome di sini diprofilkan ke kedalaman & gt 6,000 protein, daripada 18,000 protein yang diramalkan di Drosophila genom, dari embrio yang dikumpulkan pada 2-4 jam (tahap 5-7) dan 10-12 jam (tahap 13–15) perkembangan. Analisis ini diperluas untuk menangkap dinamika dalam layar ultrasensitif pada resolusi satu embrio. Data ini mewakili katalog terbesar dari Drosophila proteome embrio setakat ini, sambil memberikan kepekaan yang tiada tandingannya untuk perbandingan kuantitatif yang berpotensi untuk mengungkapkan varian proteome antara individu yang baru. Tambahan pula, penggunaan SP3 dalam kajian ini menggambarkan kelebihan potensinya dalam bidang biologi perkembangan dan klinikal lain di mana analisis kuantitatif mendalam yang dapat dihasilkan semula diperlukan untuk menjelaskan variasi antara individu dengan jumlah sampel yang jarang.


Keseronokan Otot Skeletal

Nicholas Sperelakis ,. Hugo Gonzalez-Serratos, dalam Buku Sumber Fisiologi Sel (Edisi Keempat), 2012

XIII Pelaksanaan Potensi Tindakan

Apabila EPP, yang dihasilkan di persimpangan neuromuskular, mencapai ambang untuk mendapatkan AP pada serat otot rangka vertebrata yang berkedut, AP disebarkan ke bawah serat otot di kedua arah dari plat hujung. (Pada beberapa serat otot, terdapat pelat akhir kedua yang dihidupkan oleh motoneuron yang keluar dari saraf tunjang pada tahap yang lain.) AP melampaui batas (hingga sekitar +40 mV) dan menyebarkan pada halaju berterusan sekitar 5 m / s lebih sarcolemma permukaan. Penyebaran berlaku dengan cara arus litar tempatan yang menyertai dorongan, seperti yang dibincangkan dalam Bab 19. Pembaca dirujuk ke bab itu untuk perincian mengenai arus radial (transmembran) dan juga arus membujur (paksi). Arus membujur luaran dapat menggunakan seluruh ruang ISF (kerana arus mengambil jalan paling sedikit rintangan), yang memungkinkan elektromiogram (EMG) dirakam dari kulit yang mengatasi otot rangka yang diaktifkan. Amplitud potensi EMG menjadi lebih besar apabila lebih banyak serat di dalam otot diaktifkan (penjumlahan gentian), kerana penjumlahan penurunan voltan IR yang dihasilkan oleh setiap serat diaktifkan secara serentak. Kekerapan potensi EMG mencerminkan kekerapan dan asinkron pengaktifan otot.

Serat otot rangka dibentuk oleh sel myoblast yang telah menyatu dari hujung ke hujung menjadi myotube multinuklear panjang dan kemudian gentian silinder yang kemudiannya dikembangkan. Mereka berkelakuan sebagai kabel separa tak terhingga. Maksudnya, AP dapat menyebarkan dari satu ujung serat ke ujung yang lain, secara seragam dan tidak terganggu. Pemalar ruang atau pemalar panjang (λ) kabel gentian adalah kira-kira 1.5 mm untuk serat katak sartorius (Sperelakis et al., 1967) dan sekitar 0.76 mm untuk otot EDL tikus (Sellin dan Sperelakis, 1978). Pemalar panjang adalah jarak di mana voltan yang dikenakan pada satu kawasan akan merosot ke 1 / e (1 / 2.717 = 0.368) atau 36.8% dari nilai awal. Iaitu, dalam kabel pasif, voltan merosot secara eksponensial dengan pemalar panjang tertentu seperti yang diberikan oleh:

di mana Vx ialah voltan pada jarak x dan Vo adalah voltan pada asal (x = 0). λ diberikan oleh:

Dengan andaian bahawa ro (rintangan membujur luar) adalah kecil berbanding dengan ri (ini akan berlaku untuk serat dangkal dalam bundel yang direndam dalam tab mandi besar):

di mana rm (Ω · cm) dan ri (Ω / cm) adalah rintangan membran dan rintangan membujur dalaman dinormalisasi untuk panjang unit serat, Rm (Ω · cm 2) adalah rintangan membran yang dinormalisasi untuk kedua-dua jejari dan panjang gentian, Ri (Ω · cm) adalah daya tahan myoplasma (dinormalisasi untuk panjang dan keratan rentas), dan a (cm) ialah jejari serat. Rm sering disebut longgar resistiviti membran, tetapi ini tidak tepat kerana untuk resistiviti membran benar (ρm) mesti ada pembetulan untuk ketebalan membran δ:

Faktor-faktor yang menentukan halaju perambatan aktif (θα) merangkumi intensiti arus litar tempatan, potensi ambang dan sifat kabel pasif, λ dan τm. Seperti yang dibincangkan sebelumnya, semakin besar kadar kenaikan AP, semakin besar intensiti arus litar tempatan, maka semakin besar θα. Sebagai tambahan kepada pergantungannya pada ketumpatan saluran Na + cepat (penentu kekonduksian Na + maksimum, g ¯ Na), sifat kinetik pintu pagar dan potensi ambang (Vikamaks dV / dt ditentukan juga oleh RP (atau potensi lepas landas) (berkaitan dengan h lawan Em kurva), seperti yang telah dibincangkan sebelumnya (Gamb. 42.9). Selain itu, kerana penyejukan mengurangkan pengaktifan saluran Na (Q10≃3), maks dV / dt dan θα diperlahankan dengan sewajarnya. Rm ditingkatkan dengan penyejukan, Q10 untuk RK dalam serat katak sartorius sekitar 2.8 (penyebaran ion dalam larutan bebas mempunyai Q10 kira-kira 1.2) (Sperelakis, 1969). Untuk keterangan konduksi pasif, lihat Lampiran III bab ini.

RAJAH 42.9. Perwakilan grafik kadar kenaikan maksimum APl (maks dV / dt) sebagai fungsi berehat Em atau potensi lepas landas. Maks dv / dt adalah ukuran keamatan arus masuk (kapasiti membran menjadi tetap), yang bergantung pada bilangan saluran yang tersedia untuk pengaktifan h adalah faktor ketidakaktifan Hodgkin – Huxley as gNa = g ¯ Na m 3 h, di mana gNa adalah kekonduksian Na +, g ¯ Na adalah kekonduksian maksimum dan m dan h adalah pemboleh ubah h mewakili h di t = ∞ atau keadaan stabil (secara praktikal, selepas 20 ms). Saluran Na + yang cepat mula tidak aktif pada kira-kira −75 mV dan hampir tidak aktif berlaku pada kira-kira −30 mV (h rendah). Oleh itu, maks dV / dt menurun kerana h berkurang.


3 KEPUTUSAN

3.1 Ekspresi tahap tinggi TIR1 menyebabkan penipisan protein sasaran yang bebas auxin

Pertama, kami membandingkan strain PADH1–701-TIR1 dan PADH1–409-TIR1 yang masing-masing menyatakan TIR1 ke tahap tinggi atau rendah (Rajah 1a, b). Untuk tujuan ini, kami menandakan C-terminally factor splicing Prp22 dengan perpaduan antara degron yang bergantung pada auxin, yang diberi nama AID * (Morawska & Ulrich, 2013) dan enam ulangan berturut-turut dari epitop FLAG, dalam strain PADH1–701-TIR1 dan PADH1–409-TIR1. Untuk mengukur kadar penipisan protein sasaran, kami menambahkan auxin (asam indole-3-asetat) pada kultur (waktu 0), dan sampel diambil setelah 5, 15, dan 30 minit dan dibekukan.

Kuantifikasi protein dalam sampel (Gambar 1b, c) menunjukkan bahawa pada masa 0 (tanpa auxin), tahap Prp22 47% lebih rendah pada PADH1-701-TIR1 daripada pada PADH1-409-TIR1. Oleh kerana PADH1-701-TIR1 secara eksklusif menyatakan TIR1 ke tahap yang lebih tinggi, ini mungkin menunjukkan bahawa terlalu banyak TIR1 dapat menyebabkan penipisan protein sasaran yang tidak terkawal. Juga, kadar penipisan Prp22 lebih tinggi pada PADH1–701-TIR1 daripada di PADH1–409-TIR1. Menjelang 30 minit selepas penambahan auxin, tahap Prp22 telah jatuh ke bawah 6% dari nilai awal dalam PADH1–701-TIR1, berbanding dengan 35% yang tinggal di PADH1–409-TIR1, menunjukkan bahawa tahap tinggi TIR1 mendorong penurunan yang lebih cepat.

Oleh itu, kami mencipta ketegangan-TIR1 yang dapat diinduksi dengan meletakkan OsTIR1 gen di bawah kawalan penganjur Z4EV (Z4EVpr). Ini dilakukan dengan menggantikan yang tidak penting APE2 gen dalam strain YMN3 yang menyatakan Z4EV (McIsaac et al., 2013) dengan Z4EVpr-OsTIR1-V5 kaset (Rajah 1a). Untuk mempromosikan penyetempatan protein TIR1 ke nukleus, di mana sasaran protein kami berada, kami menggabungkan isyarat penyetempatan nuklear SV40 (NLS) ke TIR1-kod urutan. Strain yang dihasilkan, PZ4EV-NTIR1, menghasilkan protein TIR1-V5 dengan cepat setelah penambahan β-estradiol ke medium kultur (Gambar 1b), dan auksin ditambahkan setelah pra-pengeluaran TIR1 selama 30 minit. Dalam keadaan ini, Prp22 habis dengan cepat selepas penambahan auxin, tanpa penipisan bebas auxin yang dapat dikesan (Rajah 1b, c).

Seterusnya, untuk menguji hipotesis bahawa tahap TIR1 berkorelasi terbalik dengan tahap protein sasaran tanpa adanya auxin, budaya PZ4EV-NTIR1 dengan AID * -6FLAG-tag PRP22 diinkubasi dengan β-estradiol tetapi tanpa auxin, dan tahap Prp22 diukur dari masa ke masa. Selaras dengan pemerhatian kami sebelumnya, pada 50 minit inkubasi β-estradiol, tahap Prp22 telah menurun dengan ketara dan mencapai 35% dari nilai awal pada 2 jam inkubasi, pada masa itu protein TIR1-V5 diinduksi dengan baik (Rajah 2 ). Penurunan bebas Auxin Yhc1 dan Rrp44 ditunjukkan dalam Rajah S2 dan kurang jelas dengan Rrp44 yang lebih banyak. Kami menyimpulkan bahawa tahap TIR1 yang tinggi boleh menyebabkan penipisan protein sasaran yang bebas auxin dalam ragi pemula.

3.2 Kadar penipisan dapat ditala dengan memodulasi jangka waktu pra-inkubasi β-estradiol

Seterusnya, kami menyiasat bagaimana kadar penurunan yang disebabkan oleh auksin dipengaruhi oleh panjang pra-inkubasi β-estradiol. Berdasarkan hasil sebelumnya, kami menjangkakan bahawa tidak hanya waktu pra-inkubasi yang lebih lama akan menyebabkan penipisan yang lebih cepat tetapi juga penipisan yang lebih bebas dari auksin dan mungkin ada waktu pra-inkubasi yang optimum, yang cenderung menjadi sasaran khusus. Untuk menguji ini, kami digunakan sebagai sasaran penipisan, Prp22 (232 salinan / sel), Prp2, satu lagi faktor penyambungan penting dengan kelimpahan yang serupa (211 salinan / sel), dan enzim penguraian yang lebih dinyatakan, Dcp1 (4,189 salinan / sel Kulak , Pichler, Paron, Nagaraj, & Mann, 2014). Kami melakukan analisis penipisan kursus waktu di mana kultur strain bertanda AID * ini diinkubasi dengan β-estradiol untuk masa yang berlainan (20, 30, 40, atau 60 min) sebelum penambahan auxin. Sampel kemudian diambil untuk analisis protein pada selang 5 minit. Apabila tahap TIR1 meningkat seiring dengan masa inkubasi β-estradiol, ini memungkinkan kita untuk mengukur hubungan antara kelimpahan TIR1 dan kadar penurunan bergantung pada auksin dari protein sasaran yang berbeza.

Analisis kuantifikasi protein (Gambar 3), menunjukkan bahawa protein sasaran yang berbeza habis pada kadar yang berbeza. Preinkubasi 20-minit dengan β-estradiol cukup untuk mengurangkan Prp22 dan Prp2 ke tahap rendah (≤ 20%) dalam 15 minit penambahan auxin, tetapi pra-inkubasi yang lebih lama dengan β-estradiol mengakibatkan degradasi bebas-auksin. Sebaliknya, Dcp1 yang lebih banyak memerlukan 60-minit pra-inkubasi β-estradiol untuk mencapai penipisan yang sama cepat dan efisien kerana lebih banyak protein Dcp1 harus diturunkan untuk mencapai penipisan yang efisien dari segi peratusan jumlah permulaan, dan ini jelas memerlukan lebih banyak Protein TIR1. Terutama, dengan ketiga protein sasaran, ada korelasi langsung antara durasi pra-inkubasi β-estradiol dan kadar penipisan sehingga jangka masa rawatan β-estradiol harus dioptimumkan untuk setiap protein sasaran (lihat juga Gambar S2).

3.3 AID β-est yang dikodkan plasmid dan kesan penyetempatan protein TIR1 terhadap kecekapan penyusutan yang disasarkan

Untuk memudahkan penyisipan komponen β-est AID ke dalam ragi pemula, kami membina plasmid sentromer, pZTRL, yang mengandungi P AKTA1 -Z4EV dan Z4EVp-OsTIR1 (tanpa NLS) kaset ekspresi (Rajah 4a). Kami kemudian menguji pZTRL dan, pada masa yang sama, menyiasat kesan penyatuan NLS ke TIR1 terhadap kecekapan menghabiskan protein nuklear. Untuk tujuan ini, kami mengukur tahap protein sasaran TIR1 dan Prp22 pada strain galas pZTRL, dan dalam dua jenis yang mengandungi genomatik yang disatukan TIR1, dengan (PZ4EV-NTIR1) atau tanpa (PZ4EV-TIR1) NLS pada terminal-N TIR1 (Rajah 4b, c).

Kami memerhatikan bahawa tahap protein TIR1 yang disebabkan oleh β-estradiol sekitar tiga kali ganda lebih tinggi pada genomik TIR1 (PZ4EV-TIR1) ketegangan berbanding dengan NLS genomik-TIR1 (PZ4EV-NTIR1) atau dikodkan plasmid TIR1 regangan, menunjukkan bahawa TIR1 lebih baik dinyatakan apabila disatukan secara genom dan tidak mempunyai NLS.Menariknya, Prp22, yang merupakan protein tempatan nuklear, cepat habis tanpa mengira kehadiran atau ketiadaan NLS dalam N-terminal protein TIR1. Ini menunjukkan bahawa, untuk penipisan protein nuklear, SV40 NLS tidak perlu ditambahkan ke TIR1. Terutama, penipisan yang disasarkan adalah lebih perlahan pada strain TIR1 yang dikodkan oleh plasmid berbanding dengan dua strain yang lain, mencapai 15% berbanding dengan 2% nilai awal Prp22 30 min selepas penambahan auxin, mungkin disebabkan oleh ekspresi TIR1 yang lebih rendah pada strain ini.


Bolehkah membalikkan duit syiling menggantikan eksperimen haiwan?

Daripada mengulangi percubaan pada model penyakit tikus di makmal mereka, para penyelidik di Berlin, Jerman menggunakan pelempar duit syiling untuk mengesahkan sama ada ubat melindungi otak daripada strok, seperti yang dilaporkan dalam makalah mereka yang menerbitkan 9 April di jurnal akses terbuka. Biologi PLOS.

Dengan eksperimen provokatif dan nampaknya tidak masuk akal ini Sophie Piper dan rakan-rakan dari Institut Kesihatan Berlin (BIH) dan Charit & eacute -Universit & aumltsmedizin Berlin secara drastik mendedahkan masalah yang berpotensi mempengaruhi banyak kajian dalam bioperubatan eksperimen. Saiz sampel yang kecil, selalunya di bawah 10, dan ambang yang hampir longgar secara universal kerana menerima kepentingan statistik (5%) membawa kepada keputusan positif positif yang tinggi dan terlalu tinggi kesan sebenar. Kajian mereka memberi amaran kepada para penyelidik bahawa, bertentangan dengan jangkaan umum, replikasi kajian - dalam keadaan yang biasa dilakukan di banyak makmal di seluruh dunia - mungkin tidak menambahkan lebih banyak bukti untuk apa yang dapat diperoleh daripada membuang duit syiling.

Banyak bidang penyelidikan sedang berjuang dengan apa yang disebut "krisis replikasi." Cukup kerap hasil dari satu makmal tidak dapat ditiru oleh penyelidik di makmal lain, dengan kadar replikasi yang berjaya sering jatuh di bawah 50%. Ini telah menggegarkan keyakinan terhadap kekuatan syarikat ilmiah secara umum dan mendorong pencarian sebab-sebab yang mendasari. Menjelang akhir ini, banyak penyelidik telah mula mengulangi eksperimen di makmal mereka sebagai bahagian yang tidak terpisahkan dari sains yang kuat dan amalan saintifik yang baik. Namun dalam artikel mereka, Piper dan rakan sekerja meneliti kegunaan mereplikasi eksperimen di dalam makmal dan mengirim pesan berhati-hati yang mengejutkan mengenai amalan replikasi semasa. Mereka memberikan latar belakang teori dan praktikal terperinci mengenai bagaimana menjalankan dan melaporkan kajian replikasi dengan betul untuk membantu para saintis menjimatkan sumber dan mencegah penggunaan haiwan yang sia-sia, sambil meningkatkan ketahanan dan kebolehulangan hasilnya.

"Replikasi adalah asas bagi proses saintifik. Kita dapat belajar dari peniruan yang berjaya dan dari kegagalan - tetapi hanya jika kita merancang, melakukan, dan melaporkannya dengan betul," kata penulis.


Dondorp AM, Nosten F, Yi P, Das D, Phyo AP, Tarning J, Lwin KM, Ariey F, Hanpithakpong W, Lee SJ, Ringwald P, Silamut K, Imwong M, Chotivanich K, Lim P, Herdman T, An SS , Yeung S, Singhasivanon P, Day NP, Lindegardh N, Socheat D, White NJ: Rintangan artemisinin dalam malaria Plasmodium falciparum. N Engl J Med. 2009, 361 (5): 455-467. 10.1056 / NEJMoa0808859.

Baird JK: Ketahanan terhadap terapi untuk jangkitan oleh Plasmodium vivax. Clin Microbiol Rev. 2009, 22 (3): 508-534. 10.1128 / CMR.00008-09.

Wellems TE, Panton LJ, Gluzman IY, do Rosario VE, Gwadz RW, Walker-Jonah A, Krogstad DJ: Rintangan klorokuin tidak dihubungkan dengan gen mdr-seperti pada salib Plasmodium falciparum. Alam semula jadi. 1990, 345 (6272): 253-255. 10.1038 / 345253a0.

Fidock DA, Nomura T, Talley AK, Cooper RA, Dzekunov SM, Ferdig MT, Ursos LM, Sidhu AB, Naude B, Deitsch KW, Su XZ, Wootton JC, Roepe PD, Wellems TE: Mutasi dalam vakuola pencernaan P. falciparum protein transmembran PfCRT dan bukti peranan mereka dalam ketahanan klorokuin. Sel Mol. 2000, 6 (4): 861-871. 10.1016 / S1097-2765 (05) 00077-8.

Sa JM, Twu O, Hayton K, Reyes S, Fay MP, Ringwald P, Wellems TE: Corak geografi ketahanan ubat Plasmodium falciparum dibezakan oleh tindak balas pembezaan terhadap amodiaquine dan chloroquine. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 2009, 106 (45): 18883-18889. 10.1073 / pnas.0911317106.

Mu J, Myers RA, Jiang H, Liu S, Ricklefs S, Waisberg M, Chotivanich K, Wilairatana P, Krudsood S, White NJ, Udomsangpetch R, Cui L, Ho M, Ou F, Li H, Song J, Li G , Wang X, Seila S, Sokunthea S, Socheat D, Sturdevant DE, Porcella SF, Fairhurst RM, Wellems TE, Awadalla P, Su XZ: Imbasan seluruh genom Plasmodium falciparum untuk pemilihan positif, penggabungan semula titik panas dan penentangan terhadap ubat antimalaria. Nat Genet. 2010, 42 (3): 268-271. 10.1038 / ng.528.

MalariaGEN: Rangkaian global untuk menyiasat epidemiologi genomik malaria. Alam semula jadi. 2008, 456 (7223): 732-737. 10.1038 / alam07632.

Mu J, Ferdig MT, Feng X, Joy DA, Duan J, Furuya T, Subramanian G, Aravind L, Cooper RA, Wootton JC, Xiong M, Su XZ: Pelbagai pengangkut yang berkaitan dengan tindak balas parasit malaria terhadap klorokuin dan kina. Mol Microbiol. 2003, 49 (4): 977-989. 10.1046 / j.1365-2958.2003.03627.x.

Anderson TJ, Nair S, Qin H, Singlam S, Brockman A, Paiphun L, Nosten F: Adakah gen transporter selain lokus rintangan klorokuin (pfcrt) dan gen rintangan multidrug (pfmdr) yang berkaitan dengan ketahanan ubat antimalaria ?. Ejen Antimikrob Chemother. 2005, 49 (6): 2180-2188. 10.1128 / AAC.49.6.2180-2188.2005.

Gardner MJ, Tettelin H, Carucci DJ, Cummings LM, Aravind L, Koonin EV, Shallom S, Mason T, Yu K, Fujii C, Pederson J, Shen K, Jing J, Aston C, Lai Z, Schwartz DC, Pertea M , Salzberg S, Zhou L, Sutton GG, Clayton R, White O, Smith HO, Fraser CM, Adams MD, Venter JC, Hoffman SL: Urutan kromosom 2 dari parasit malaria manusia Plasmodium falciparum. Sains. 1998, 282 (5391): 1126-1132.

Pizzi E, Frontali C: Kawasan kerumitan rendah dalam protein Plasmodium falciparum. Genom Res. 2001, 11 (2): 218-229. 10.1101 / gr.GR-1522R.

Brocchieri L: Kawasan kerumitan rendah dalam protein Plasmodium: mencari fungsi. Genom Res. 2001, 11 (2): 195-197. 10.1101 / gr.176401.

Xue HY, Forsdyke DR: Segmen kerumitan rendah dalam protein Plasmodium falciparum terutamanya penyesuaian tahap asid nukleik. Mol Biochem Parasitol. 2003, 128 (1): 21-32. 10.1016 / S0166-6851 (03) 00039-2.

Kimura M: Kadar evolusi pada tahap molekul. Alam semula jadi. 1968, 217 (5129): 624-626. 10.1038 / 217624a0.

Ohta T: Penggantian mutan yang sedikit merosakkan dalam evolusi. Alam semula jadi. 1973, 246 (5428): 96-98. 10.1038 / 246096a0.

Hughes AL: Netraliti dekat: kelebihan teori evolusi molekul yang neutral. Ann N Y Acad Sci. 2008, 1133: 162-179. 10.1196 / tahun.1438.001.

Koonin EV: evolusi Darwin berdasarkan genomik. Asid Nukleik Res. 2009, 37 (4): 1011-1034.

Jeffares DC, Pain A, Berry A, Cox AV, Stalker J, Ingle CE, Thomas A, Quail MA, Siebenthall K, Uhlemann AC, Kyes S, Krishna S, Newbold C, Dermitzakis ET, Berriman M: Variasi genom dan evolusi evolusi parasit malaria Plasmodium falciparum. Nat Genet. 2007, 39 (1): 120-125. 10.1038 / ng1931.

Kaya SM, Leendertz FH, Xu G, LeBreton M, Djoko CF, Aminake MN, Takang EE, Diffo JL, Pike BL, Rosenthal BM, Formenty P, Boesch C, Ayala FJ, Wolfe ND: Asal malaria malignan. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 2009, 106 (35): 14902-14907. 10.1073 / pnas.0907740106.

Kryazhimskiy S, Plotkin JB: Genetik populasi dN / dS. Genetik PLoS. 2008, 4 (12): e1000304-10.1371 / jurnal.pgen.1000304.

Korsinczky M, Chen N, Kotecka B, Saul A, Rieckmann K, Cheng Q: Mutasi dalam Plasmodium falciparum cytochrome b yang dikaitkan dengan ketahanan atovaquone terletak di lokasi yang mengikat dadah. Ejen Antimikrob Chemother. 2000, 44 (8): 2100-2108. 10.1128 / AAC.44.8.2100-2108.2000.

Sidhu AB, Sun Q, Nkrumah LJ, Dunne MW, Sacchettini JC, Fidock DA: Keberkesanan in vitro, pemilihan rintangan, dan kajian pemodelan struktur mengimplikasikan apiklast parasit malaria sebagai sasaran azithromycin. J Biol Chem. 2007, 282 (4): 2494-2504.

Rottmann M, McNamara C, Yeung BK, Lee MC, Zou B, Russell B, Seitz P, Plouffe DM, Dharia NV, Tan J, Cohen SB, Spencer KR, Gonzalez-Paez GE, Lakshminarayana SB, Goh A, Suwanarusk R, Jegla T, Schmitt EK, Beck HP, Brun R, Nosten F, Renia L, Dartois V, Keller TH, Fidock DA, Winzeler EA, Diagana TT: Spiroindolones, kelas sebatian yang kuat untuk rawatan malaria. Sains. 2010, 329 (5996): 1175-1180. 10.1126 / sains.1193225.

Kimura M: Masa rata-rata sehingga penetapan alel mutan pada populasi terhingga di bawah tekanan mutasi berterusan: Kajian dengan kaedah analisis, numerik, dan pseudo-sampling. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 1980, 77 (1): 522-526. 10.1073 / pnas.77.1.522.

Carlton JM, Adams JH, Silva JC, Bidwell SL, Lorenzi H, Caler E, Crabtree J, Angiuoli SV, Merino EF, Amedeo P, Cheng Q, Coulson RM, Crabb BS, Del Portillo HA, Essien K, Feldblyum TV, Fernandez -Becerra C, Gilson PR, Gueye AH, Guo X, Kang'a S, Kooij TW, Korsinczky M, Meyer EV, Nene V, Paulsen I, White O, Ralph SA, Ren Q, Sargeant TJ, et al: Genomik perbandingan parasit malaria manusia yang diabaikan Plasmodium vivax. Alam semula jadi. 2008, 455 (7214): 757-763. 10.1038 / alam07327.

DePristo MA, Zilversmit MM, Hartl DL: Mengenai banyaknya, komposisi asid amino, dan dinamika evolusi kawasan kerumitan rendah dalam protein. Gen. 2006, 378: 19-30.

Zilversmit MM, Volkman SK, Depristo MA, Wirth DF, Awadalla P, Hartl DL: Kawasan Kerumitan Rendah di Plasmodium falciparum: Pautan Hilang dalam Evolusi Genom Ekstrem. Mol Biol Evol. 2010

Nomura T, Carlton JM, Baird JK, del Portillo HA, Fryauff DJ, Rathore D, Fidock DA, Su X, Collins WE, McCutchan TF, Wootton JC, Wellems TE: Bukti untuk mekanisme ketahanan klorokuin yang berbeza pada 2 spesies Plasmodium yang menyebabkan malaria manusia. J Jangkitan Dis. 2001, 183 (11): 1653-1661. 10.1086 / 320707.

Cowman AF, Morry MJ, Biggs BA, Cross GA, Foote SJ: Perubahan asid amino yang dikaitkan dengan ketahanan pyrimethamine dalam gen sintase dihidrofolat reduktase-thymidylate Plasmodium falciparum. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 1988, 85 (23): 9109-9113. 10.1073 / pnas.85.23.9109.

Triglia T, Cowman AF: Struktur utama dan ekspresi gen dihydropteroate synthetase Plasmodium falciparum. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 1994, 91 (15): 7149-7153. 10.1073 / pnas.91.15.7149.

Ng PC, Henikoff S: Meramalkan penggantian asid amino yang merosakkan. Genom Res. 2001, 11 (5): 863-874. 10.1101 / gr.176601.

Sunyaev S, Ramensky V, Koch I, Lathe W, Kondrashov AS, Bork P: Ramalan alel manusia yang merosakkan. Hum Mol Genet. 2001, 10 (6): 591-597. 10.1093 / hmg / 10.6.591.

Thomas PD, Campbell MJ, Kejariwal A, Mi H, Karlak B, Daverman R, Diemer K, Muruganujan A, Narechania A: PANTHER: perpustakaan keluarga protein dan keluarga kecil yang diindeks berdasarkan fungsi. Genom Res. 2003, 13 (9): 2129-2141. 10.1101 / gr.772403.

Jambou R, Martinelli A, Pinto J, Gribaldo S, Legrand E, Niang M, Kim N, Pharath L, Volnay B, Ekala MT, Bouchier C, Fandeur T, Berzosa P, Benito A, Ferreira ID, Ferreira C, Vieira PP , Alecrim MG, Mercereau-Puijalon O, Cravo P: Penstrukturan geografi kepelbagaian gen retikulum Plasmodium falciparum sarco (endo) Ca2 + ATPase (PfSERCA). PLoS Satu. 2010, 5 (2): e9424-10.1371 / jurnal.pone.0009424.

Dharia NV, Bright AT, Westenberger SJ, Barnes SW, Batalov S, Kuhen K, Borboa R, Federe GC, McClean CM, Vinetz JM, Neyra V, Llanos-Cuentas A, Barnwell JW, Walker JR, Winzeler EA: Whole-genome penjujukan dan analisis microarray dari ex vivo Plasmodium vivax mendedahkan tekanan selektif pada gen penentangan ubat yang berpotensi. Proc Natl Acad Sci Amerika Syarikat. 2010, 107 (46): 20045-20050. 10.1073 / pnas.1003776107.

Weedall GD, Conway DJ: Mengesan tandatangan pemilihan keseimbangan untuk mengenal pasti sasaran imuniti anti-parasit. Tren Parasitol. 2010, 26 (7): 363-369. 10.1016 / j.pt.2010.04.002.

Su X, Kirkman LA, Fujioka H, ​​Wellems TE: Polimorfisme kompleks dalam protein kira-kira 330 kDa dihubungkan dengan P. falciparum yang tahan klorokuin di Asia Tenggara dan Afrika. Sel. 1997, 91 (5): 593-603. 10.1016 / S0092-8674 (00) 80447-X.

Ferdig MT, Cooper RA, Mu J, Deng B, Joy DA, Su XZ, Wellems TE: Membedah lokus rintangan kina tahap rendah pada parasit malaria. Mol Microbiol. 2004, 52 (4): 985-997. 10.1111 / j.1365-2958.2004.04035.x.

Prugnolle F, McGee K, Keebler J, Awadalla P: Pemilihan membentuk genom malaria dan mendorong perbezaan antara patogen yang menjangkiti hominid berbanding tikus. BMC Evol Biol. 2008, 8: 223-10.1186 / 1471-2148-8-223.

Krief S, Escalante AA, Pacheco MA, Mugisha L, Andre C, Halbwax M, Fischer A, Krief JM, Kasenene JM, Crandfield M, Cornejo OE, Chavatte JM, Lin C, Letourneur F, Gruner AC, McCutchan TF, Renia L , Snounou G: Mengenai kepelbagaian parasit malaria pada kera Afrika dan asal-usul Plasmodium falciparum dari Bonobos. Pathog PLoS. 2010, 6 (2): e1000765-10.1371 / jurnal.ppat.1000765.

Liu W, Li Y, Learn GH, Rudicell RS, Robertson JD, Keele BF, Ndjango JB, Sanz CM, Morgan DB, Locatelli S, Gonder MK, Kranzusch PJ, Walsh PD, Delaporte E, Mpoudi-Ngole E, Georgiev AV, Muller MN, Shaw GM, Peeters M, Sharp PM, Rayner JC, Hahn BH: Asal parasit malaria manusia Plasmodium falciparum di gorila. Alam semula jadi. 2010, 467 (7314): 420-425. 10.1038 / alam09442.

King JL, Jukes TH: Evolusi bukan Darwin. Sains. 1969, 164 (881): 788-798. 10.1126 / sains.164.3881.788.

Scherf A, Petersen C, Carter R, Alano P, Nelson R, Aikawa M, Mattei D, da Silva LP, Leech J: Pencirian mutan Plasmodium falciparium yang telah menghapus sebahagian besar lokus Pf11-1 khusus gametosit. Mem Inst Oswaldo Cruz. 1992, 87 (Suppl 3): 91-94.

Bozdech Z, Llinas M, Pulliam BL, Wong ED, Zhu J, DeRisi JL: Transkrip dari kitaran perkembangan intraerythrocytic Plasmodium falciparum. PLoS Biol. 2003, 1 (1): E5-

Le Roch KG, Zhou Y, Blair PL, Grainger M, Moch JK, Haynes JD, De La Vega P, Holder AA, Batalov S, Carucci DJ, Winzeler EA: Penemuan fungsi gen dengan penyataan profil kitaran hidup parasit malaria. Sains. 2003, 301 (5639): 1503-1508. 10.1126 / sains.1087025.

Volkman SK, Sabeti PC, DeCaprio D, Neafsey DE, Schaffner SF, Milner DA, Daily JP, Sarr O, Ndiaye D, Ndir O, Mboup S, Duraisingh MT, Lukens A, Derr A, Stange-Thomann N, Wagoner S, Onofrio R, Ziaugra L, Mauceli E, Gnerre S, Jaffe DB, Zainoun J, Wiegand RC, Birren BW, Hartl DL, Galagan JE, Lander ES, Wirth DF: Peta kepelbagaian genom di Plasmodium falciparum. Nat Genet. 2007, 39 (1): 113-119. 10.1038 / ng1930.

Mu J, Awadalla P, Duan J, McGee KM, Keebler J, Seydel K, McVean GA, Su XZ: Variasi sel seluruh genom dan pengenalan sasaran vaksin dalam genom Plasmodium falciparum. Nat Genet. 2007, 39 (1): 126-130. 10.1038 / ng1924.

Hartl DL, Volkman SK, Nielsen KM, Barry AE, Day KP, Wirth DF, Winzeler EA: Genetik populasi paradoks Plasmodium falciparum. Tren Parasitol. 2002, 18 (6): 266-272. 10.1016 / S1471-4922 (02) 02268-7.

Nei M, Gojobori T: Kaedah mudah untuk menganggarkan bilangan penggantian nukleotida sinonim dan tidak sinonim. Mol Biol Evol. 1986, 3 (5): 418-426.

Mu J, Duan J, Makova KD, Joy DA, Huynh CQ, Branch OH, Li WH, Su XZ: SNP seluruh kromosom mendedahkan asal kuno untuk Plasmodium falciparum. Alam semula jadi. 2002, 418 (6895): 323-326. 10.1038 / sifat00836.

Li WH: Anggaran tidak adil mengenai kadar penggantian sinonim dan tidak sinonim. J Mol Evol. 1993, 36 (1): 96-99. 10.1007 / BF02407308.

Wootton JC: Domain bukan globular dalam urutan protein: segmentasi automatik menggunakan langkah-langkah kerumitan. Komput Chem. 1994, 18 (3): 269-285. 10.1016 / 0097-8485 (94) 85023-2.

Hall N, Karras M, Raine JD, Carlton JM, Kooij TW, Berriman M, Florens L, Janssen CS, Pain A, Christophides GK, James K, Rutherford K, Harris B, Harris D, Churcher C, Quail MA, Ormond D , Doggett J, Trueman HE, Mendoza J, Bidwell SL, Rajandream MA, Carucci DJ, Yates JR, Kafatos FC, Janse CJ, Barrell B, Turner CM, Waters AP, Sinden RE: Tinjauan menyeluruh mengenai kitaran hidup Plasmodium mengikut genomik , analisis transkriptik, dan proteomik. Sains. 2005, 307 (5706): 82-86. 10.1126 / sains.1103717.

Tanabe K, Zakeri S, Palacpac NM, Afsharpad M, Randrianarivelojosia M, Kaneko A, Marma AS, Horii T, Mita T: Mutasi spontan dalam Plasmodium falciparum sarcoplasmic / endoplasmic reticulum gen2 Ca2 + -ATPase (PfATP6) gen populasi yang tidak tersebar secara geografis kepada terapi gabungan berasaskan artemisinin. Ejen Antimikrob Chemother. 2011, 55 (1): 94-100. 10.1128 / AAC.01156-10.

Dahlstrom S, Veiga MI, Ferreira P, Martensson A, Kaneko A, Andersson B, Bjorkman A, Gil JP: Kepelbagaian retikulum sarco / endoplasma Ca (2 +) - ATPase orthologue Plasmodium falciparum (PfATP6). Menjangkiti Genet Evol. 2008, 8 (3): 340-345. 10.1016 / j.meegid.2008.02.002.

Gama BE, de Oliveira NK, de Souza JM, Santos F, de Carvalho LJ, Melo YF, Rosenthal PJ, Daniel-Ribeiro CT, Ferreira-da-Cruz Mde F: isolat Brazil Plasmodium falciparum: penyiasatan calon polimorfisme untuk ketahanan artemisinin sebelum pengenalan terapi kombinasi berasaskan artemisinin. Malar J. 2010, 9: 355-10.1186 / 1475-2875-9-355.

Eshetu T, Berens-Riha N, Fekadu S, Tadesse Z, Gurkov R, Holscher M, Loscher T, Miranda IB: Corak mutasi berbeza Plasmodium falciparum di kalangan pesakit di Jimma University Hospital, Ethiopia. Malar J. 2010, 9: 226-10.1186 / 1475-2875-9-226.

Tahar R, Ringwald P, Basco LK: Epidemiologi molekul malaria di Kamerun. XXVIII. Aktiviti in vitro dihydroartemisinin terhadap isolat klinikal Plasmodium falciparum dan analisis urutan gen P. falciparum ATPase 6. Am J Trop Med Hyg. 2009, 81 (1): 13-18.

Bertaux L, Quang le H, Sinou V, Thanh NX, Parzy D: Mutasi PfATP6 baru yang terdapat di isolat Plasmodium falciparum dari Vietnam. Ejen Antimikrob Chemother. 2009, 53 (10): 4570-4571. 10.1128 / AAC.00684-09.

Imwong M, Dondorp AM, Nosten F, Yi P, Mungthin M, Hanchana S, Das D, Phyo AP, Lwin KM, Pukrittayakamee S, Lee SJ, Saisung S, Koecharoen K, Nguon C, Day NP, Socheat D, White NJ : Meneroka sumbangan gen calon untuk ketahanan artemisinin di Plasmodium falciparum. Ejen Antimikrob Chemother. 2010, 54 (7): 2886-2892. 10.1128 / AAC.00032-10.

Bacon DJ, McCollum AM, Griffing SM, Salas C, Soberon V, Santolalla M, Haley R, Tsukayama P, Lucas C, Escalante AA, Udhayakumar V: Dinamika corak penentangan ubat malaria di wilayah lembah Amazon berikutan perubahan dalam rawatan nasional Peru polisi untuk malaria yang tidak rumit. Ejen Antimikrob Chemother. 2009, 53 (5): 2042-2051. 10.1128 / AAC.01677-08.

Ibrahim ML, Khim N, Adam HH, Ariey F, Duchemin JB: Polimorfisme PfATPase di Niger: pengesanan tiga mutasi titik baru. Malar J. 2009, 8: 28-10.1186 / 1475-2875-8-28.

Menegon M, Sannella AR, Majori G, Severini C: Pengesanan mutasi titik baru dalam gen calon Plasmodium falciparum ATPase6 untuk penentangan terhadap artemisinin. Parasitol Int. 2008, 57 (2): 233-235. 10.1016 / j.parint.2007.12.004.


Abstrak

Objektif— Kajian terdahulu menunjukkan bahawa protein kejutan haba (HSP) 60 mempunyai peranan penting dalam perkembangan aterosklerosis. Kami memeriksa sama ada protein HSP70 yang beredar dan antibodi anti-HSP70 dikaitkan dengan penyakit arteri koronari (CAD).

Kaedah dan Hasil— Sampel darah dari 421 pesakit (62% lelaki, usia rata-rata 57 tahun) yang dinilai untuk CAD dengan angiografi koronari diuji. Serum HSP70 dapat dikesan pada 67% subjek kajian dengan tahap antara 0.2 hingga 27.1 ng / mL (min, 1.08 median, 0.5). Tahap HSP70 lebih tinggi pada pesakit bukan CAD daripada pesakit CAD (median, 0,72 berbanding 0,34 P= 0.0006). Individu dengan tahap HSP70 melebihi median (0,5 ng / mL) mempunyai separuh risiko CAD berbanding individu dengan tahap di bawah median (nisbah odds disesuaikan, had keyakinan 0,52 95%, 0,32 hingga 0,86). Perkaitan tahap HSP70 tinggi dengan risiko CAD rendah tidak bergantung kepada faktor risiko CAD tradisional (P= 0.011). Keparahan penyakit (bilangan saluran penyakit) juga dikaitkan dengan tahap protein HSP70 (P= 0.010). Nisbah peluang untuk menghidap penyakit multivessel untuk pesakit dengan kadar protein HSP70 yang tinggi adalah 0.54 (had keyakinan 95%, 0.36 hingga 0.81). Sebaliknya, tidak ada hubungan antara seropositiviti IgG anti-HSP70 dan kelaziman CAD didapati (P=0.916).

Kesimpulan— Data ini memberikan bukti pertama bahawa tahap tinggi HSP70 manusia dikaitkan dengan risiko CAD yang rendah, mungkin melalui pelbagai kesan perlindungannya terhadap tindak balas sel terhadap tekanan.

Protein kejutan haba (HSP) merupakan sekumpulan protein besar yang membantu tindak balas sel terhadap tekanan akut. Kepentingan protein ini terbukti dengan fakta bahawa ia terdapat di mana-mana dan sangat terpelihara di seluruh spesies. Walaupun HSP terutama molekul intraselular, ketika diekspresikan secara berlebihan sebagai tindak balas terhadap tekanan, mereka dapat diangkut ke dan tinggal di membran sel, di mana mereka dapat dikenali oleh sistem pengawasan imun dan berfungsi sebagai autoantigen. Mereka juga dapat dilepaskan dari sel ke dalam darah dan mempunyai aktiviti biologi. 1,2 Oleh itu, apabila diekspresikan secara berlebihan, HSP dapat membangkitkan tindak balas selain daripada yang berkaitan dengan lokasi intraselularnya, dan tindak balas ini mungkin berpotensi menimbulkan akibat buruk. Sebagai contoh, tahap serum HSP60 meningkat secara signifikan pada subjek dengan aterosklerosis karotid / kejadian serta pesakit dengan hipertensi sempadan. 3,4 Antibodi terhadap HSP60 telah dilaporkan berkaitan dengan kehadiran dan keparahan penyakit arteri koronari (CAD) yang signifikan secara klinikal. 5

Bukti eksperimen menunjukkan peranan kardioproteksi anggota keluarga lain, HSP70, dalam beberapa contoh tekanan miokardium akut. 6–8 Sebagai contoh, jantung tikus transgenik yang terlalu banyak menyatakan HSP70 menunjukkan daya tahan yang lebih baik terhadap kecederaan iskemia. 8 Oleh kerana antibodi terhadap HSP70 telah terdeteksi, seperti halnya dengan HSP60, ini menimbulkan kemungkinan bahwa HSP70 dapat memicu tindak balas autoimun yang dapat mengurangi kesan selular yang bermanfaat intrinsik atau, seperti tindak balas terhadap HSP60, bahkan dapat memperburuk perkembangan aterosklerosis. Walau bagaimanapun, terdapat data eksperimen atau klinikal yang terhad berkenaan dengan kesan HSP70 pada aterogenesis.

Tujuan penyelidikan ini adalah untuk menentukan sama ada wujud hubungan antara ekspresi HSP70 dan aterogenesis. Secara khusus, kami menentukan sama ada protein HSP70 yang beredar dan antibodi anti-HSP70 dikaitkan dengan CAD.

Kaedah

Mata pelajaran

Empat ratus dua puluh satu individu, di bawah protokol yang diluluskan oleh Lembaga Kajian Institusi Kesihatan Nasional Institut Kesihatan, memasuki kajian ini. Kohort kajian terdiri daripada individu yang mengalami sakit dada atau dengan ujian tidak invasif yang sesuai dengan iskemia miokardium yang dirujuk untuk angiografi koronari. Semua peserta menjalani pemeriksaan klinikal dan penilaian pendedahan semasa dan masa lalu terhadap faktor risiko CAD tradisional, seperti yang dijelaskan sebelumnya. 5 Seorang pesakit didefinisikan mempunyai CAD jika terdapat bukti angiografi aterosklerosis (en50% stenosis sekurang-kurangnya 1 arteri koronari utama oleh angiografi koronari). Pesakit dengan penyakit jantung valvular yang signifikan atau cardiomyopathy nonatherosclerotic dikeluarkan. Tidak ada pesakit yang mengakui kajian ini mengalami infark miokard dalam 3 bulan terakhir.

Serum HSP70 Protein dan Antibodi Anti-HSP70

Sampel serum diperoleh dari subjek kajian sebelum waktu angiografi koronari. Sampel dibekukan pada suhu −80 ° C, dan aliquot hanya dicairkan ketika melakukan ujian tertentu. Tahap protein serum HSP70 ditentukan menggunakan kit ELISA yang tersedia secara komersial (StressGen Biotechnologies Corp). Kepekatan protein HSP70 ditentukan dengan perbandingan dengan lengkung standard mengikut arahan pengeluar. Keluk standard mempunyai julat 0,78 hingga 50 ng / mL, dan kepekaan ujian adalah 0,2 ng / mL.

Antibodi IgG terhadap HSP70 manusia ditentukan oleh ELISA. Plat mikrotiter sembilan puluh enam telaga dilapisi dengan 5 μg / mL rekombinan HSP70 (StressGen Biotechnologies Corp) dalam 100 μL karb / Bicarb buffer (pH 9.6) per telaga pada suhu 4 ° C semalam. Setelah mencuci dengan pencuci muka (Wampole) dan menyekat dengan 3% BSA dalam PBS pada suhu bilik selama 3 jam, pinggan diinkubasi dengan 100 μL sampel serum yang dicairkan dalam Serum Diluent (Wampole) hingga 1 dalam 50 pada suhu bilik selama 1 jam. Setelah mencuci tambahan, pinggan diinkubasi dengan IgG kambing anti-manusia lobak-peroksidase-konjugasi dicairkan 1 dalam 10 000 dengan PBS. Setelah mencuci, larutan kromogen / substrat 100 μL yang mengandung tetramethylbenzidine (Wampole) ditambahkan ke dalam sumur. Penyerapan pada 450 nm diukur setelah 10 minit setelah penambahan larutan berhenti (Wampole). Selepas pembetulan untuk penyerapan latar belakang, sampel serum dianggap positif untuk antibodi terhadap HSP70 manusia jika ketumpatan optik melebihi nilai pemotongan yang ditentukan secara prospektif 0.60. Nilai pemotongan ini dikira dari nilai serapan kawalan negatif dan positif.

Tahap Protein Serum C-Reaktif

Protein serum C-reactive (CRP) diukur dengan teknologi immunoassay polarisasi pendarfluor (FPIA) (penganalisis TDxFLEx, Laboratorium Abbott). Dengan menggunakan ujian ini, 95% individu yang sihat (n = 202) mempunyai tahap CRP ≤0.5 mg / dL dan 98% mempunyai tahap ≤1.0 mg / dL, masing-masing, dalam sera mereka. Pekali variasi antara ujian ini (n = 31) adalah 4.3% dan 2.2% pada tahap min masing-masing 1.10 dan 2.94 mg / dL.

Analisis statistik

Data yang diedarkan secara normal disajikan sebagai min dan sisihan piawai (SD), sedangkan data yang diedarkan secara tidak normal disajikan sebagai julat median dan interkuartil (IQR). Perbandingan antara titik akhir dibuat menggunakan t menguji taburan parametrik dan Mann-Whitney U ujian untuk taburan bukan parametrik. Data kategoris dianalisis dengan ujian χ 2 atau uji tepat Fisher untuk sampel kecil. Semua ujian adalah dua sisi. Pemboleh ubah dikotom yang menunjukkan kehadiran dan keparahan CAD dimodelkan sebagai fungsi faktor lain menggunakan regresi logistik berganda. Nisbah odds (OR) digunakan sebagai ukuran kehadiran dan keparahan CAD pada pesakit dengan faktor risiko tertentu berbanding dengan mereka yang tidak mempunyai faktor tersebut atau sebagai faktor pendaraban untuk setiap kenaikan unit atau tahap HSP70. Kovariat yang dipertimbangkan adalah umur, seks lelaki, merokok, diabetes, hiperkolesterolemia, hipertensi (faktor risiko CAD tradisional), CRP serum, protein HSP70, dan tahap antibodi anti-HSP70. Semua kovariat diperiksa sebagai peramal kehadiran dan keparahan CAD dalam analisis univariat dan sebagai kumpulan dalam satu model multivariat.

Keputusan

Ciri-ciri Pesakit

Sebanyak 421 subjek dikaji 62% adalah lelaki dan 72% berkulit putih, berumur antara 30 hingga 82 tahun (min, 57.3 median, 57.0 tahun). Terdapat 258 (61%) dengan bukti angiografi CAD (stenosis ≥50% sekurang-kurangnya 1 arteri koronari utama oleh angiografi koronari). Dengan pengecualian hipertensi, faktor risiko CAD tradisional (umur, seks lelaki, diabetes, dan hiperkolesterolemia) dikaitkan secara signifikan dengan risiko CAD oleh analisis univariat dan multivariat. Merokok dikaitkan secara signifikan dengan CAD dengan analisis univariat tetapi bukan analisis multivariat (Jadual 1).

JADUAL 1. Persatuan Kehadiran CAD Dengan Faktor Risiko Tradisional

Perkaitan Antibodi HSP70 dan HSP70 dengan Risiko CAD

Protein serum HSP70 dapat dikesan pada 283 dari 421 (67%) subjek kajian, dengan tahap antara 0.2 hingga 27.1 ng / mL (min, 1.08 median, 0.5 ng / mL). Tahap protein HSP70 lebih tinggi pada pesakit bukan CAD daripada pesakit CAD (median, 0,72 dan IQR, 1,42 berbanding median, 0,34 dan IQR, 1,21 ng / mL P= 0.001). Di samping itu, kumpulan tahap HSP70 yang tinggi (di atas nilai median & gt0.5 ng / mL) mengandungi 51% pesakit CAD, sedangkan kumpulan HSP70 rendah mempunyai pesakit CAD 71% (P& lt0.001). Analisis regresi logistik multivariat menunjukkan bahawa individu dengan tahap HSP70 yang tinggi mempunyai separuh risiko CAD daripada individu dengan tahap rendah (OR disesuaikan, had keyakinan 0.52 95% [CL], 0.32 hingga 0.86). Perkaitan tahap HSP70 tinggi dengan risiko CAD rendah tidak bergantung kepada faktor risiko CAD tradisional (P=0.011).

Gambar 1 menunjukkan kesan protein HSP70 terhadap risiko CAD pada setiap kumpulan kepekatan protein HSP70 (ditunjukkan oleh HSP70 kuartil). Individu dalam kuartil tertinggi tahap HSP70 (& gt75th) mempunyai 59% risiko CAD lebih rendah berbanding dengan mereka yang berada di kuartil terendah (ke-25). OR dengan 95% CL risiko CAD yang berkaitan dengan kepekatan protein HSP70 sama atau lebih besar daripada persentil ke-25, 50, 75, dan 90 dari taburan kawalan adalah 0.42 (0.26 hingga 0.66), 0.46 (0.28 hingga 0.75), 0.44 ( 0.24 hingga 0.79), dan 0.38 (0.17 hingga 0.85), masing-masing. Penyesuaian untuk faktor risiko CAD tradisional tidak mempengaruhi pengurangan risiko. Tidak ada hubungan antara kepekatan protein HSP70 dengan pengurangan risiko CAD. Berbeza dengan protein HSP70, antibodi HSP70 anti-manusia dikesan hanya dalam 34% subjek kajian. Tidak ada perbezaan dalam prevalensi seropositiviti anti-HSP70 antara pesakit CAD dan bukan CAD didapati (masing-masing 34,2% berbanding 33,71% P=0.916).

Rajah 1. ATAU dengan 95% CL untuk CAD dalam kumpulan kepekatan protein HSP70 individu yang ditunjukkan oleh kuartil HSP70.

Perkaitan Antibodi HSP70 dan HSP70 dengan Keterukan CAD

Hubungan protein HSP70 yang serupa jatuh di bawah berbanding di atas median (& gt0,5 ng / mL) juga diperhatikan dengan tahap keparahan penyakit, seperti yang dinilai oleh bilangan saluran penyakit (Gambar 2). Tahap protein HSP70 di atas median berkaitan dengan keterukan CAD yang kurang (P untuk trend = 0.01). OR yang disesuaikan dengan penyakit multivessel untuk pesakit dengan tahap HSP70 yang tinggi adalah 0.54 (95% CL, 0.36 hingga 0.81 P= 0.003). Walau bagaimanapun, tidak ada hubungan antara antibodi anti-HSP70 dan keparahan CAD (P=0.264).

Gambar 2. Prevalensi keparahan CAD berhubung dengan tahap protein HSP70. Seorang pesakit didefinisikan sebagai mempunyai 1-, 2-, 3-, atau tanpa kapal CAD berdasarkan dokumentasi angiografi en50% stenosis setiap 3 arteri koronari utama. Data disajikan dari 395 pesakit di mana data mengenai jumlah kapal yang berpenyakit tersedia. *P& lt0.01 semasa membandingkan kumpulan multivessel di kumpulan rendah berbanding kumpulan HSP70 tinggi menggunakan ujian univariate.

Hubungan Antibodi Protein HSP70 dan HSP70 dengan Faktor Risiko CAD Tradisional

Hubungan protein HSP70 dengan faktor risiko CAD ditunjukkan dalam Jadual 2. Tahap peningkatan protein HSP70 tidak dikaitkan dengan seks lelaki, merokok, diabetes, hiperkolesterolemia, atau hipertensi pada analisis univariat dan multivariat (semua P& gt0.05). Walaupun protein HSP70 dikaitkan dengan usia, tahap protein HSP70 yang rendah pada pesakit dengan CAD tidak bergantung pada usia. Tidak terdapat hubungan antara kehadiran antibodi HSP70 dan faktor risiko CAD (semua P& gt0.05, data tidak ditunjukkan).

JADUAL 2. Hubungan Tahap HSP70 Dengan Faktor Risiko CAD Tradisional

Perkaitan Antibodi HSP70 dan HSP70 dengan Keradangan

Tahap min CRP adalah 0.84 ± 0.04 pada individu dengan tahap tinggi protein HSP70 dan 0.90 ± 0.05 mg / dL ± SE pada kumpulan protein HSP70 rendah (P= 0.361). Tahap min CRP adalah 0.88 ± 0.05 pada individu dengan seropositiviti anti-HSP70 dan 0.87 ± 0.04 mg / dL ± SE dalam seronegativiti anti-HSP70 (P= 0.905). Tidak ada hubungan antara tahap CRP dan tahap protein HSP70 atau kehadiran antibodi HSP70 (kedua-duanya) P& gt0.05).

Perbincangan

HSP adalah protein intraselular yang banyak, dibahagikan kepada keluarga yang berbeza mengikut berat molekulnya. Mereka dijumpai dalam organisma prokariotik dan eukariotik dan sangat terpelihara, dan fungsi utamanya nampaknya sebagai pendamping, terlibat dalam lipatan dan pengangkutan protein. 1,2

HSP70 adalah salah satu HSP yang lebih banyak dikaji. Dengan tekanan, HSP70 berpindah ke nukleus dan bersekutu dengan nukleoli. 9,10 Ia berkongsi banyak fungsi kelas HSP dan, sebagai tambahan, nampaknya melindungi daripada kecederaan iskemia. Kajian menunjukkan bahawa pendedahan hati haiwan yang terisolasi terhadap tekanan terma atau iskemia mendorong ekspresi HSP70, 11 dan kajian seterusnya 12,13 menunjukkan bahawa pendedahan keseluruhan badan terhadap haba, yang mengakibatkan peningkatan tahap HSP70, meningkatkan pemulihan jantung haiwan dari iskemia - kecederaan yang disebabkan. Bukti yang lebih meyakinkan mengenai peranan pelindung HSP70 dalam kecederaan yang disebabkan oleh iskemia ditemui dalam kajian berdasarkan genetik. Ini telah menunjukkan bahawa ekspresi berlebihan HSP70 pada sel jantung primer yang dikultur melindungi sel-sel ini daripada tekanan terma atau iskemia, sedangkan ekspresi berlebihan HSP56 dan HSP60 tidak mempunyai kesan perlindungan. 14-16 Kajian juga mendapati bahawa jantung tikus transgenik yang mengekspresikan HSP70 lebih tahan terhadap kecederaan iskemia. 17–20

Kerana kesan perlindungan HSP yang diketahui tetapi kemungkinan HSP dapat menyebabkan jangka panjang, melalui pengembangan autoantibodi, kepada penyakit kronik (seperti yang ditunjukkan untuk HSP60), 1,2 penyelidikan ini dilakukan. Kami berusaha untuk menentukan sama ada protein HSP70 yang beredar dan antibodi anti-HSP70 dikaitkan dengan CAD.

Dalam kajian kami, serum HSP70 dapat dikesan pada hampir 70% subjek kajian. Yang paling menarik, ia jauh lebih tinggi pada pesakit bukan CAD daripada pesakit CAD, sebuah persatuan yang bebas daripada faktor risiko tradisional. Selanjutnya, keparahan penyakit, seperti yang dinilai oleh jumlah kapal yang berpenyakit, juga berkaitan terbalik dengan tahap HSP70. Sebaliknya, antibodi terhadap HSP70 hanya terdapat pada sepertiga subjek kajian, dan tidak ada hubungan antara antibodi terhadap HSP70 dan CAD.

Mekanisme yang bertanggungjawab untuk hubungan songsang antara tahap serum HSP70 dan CAD adalah, pada masa ini, sangkaan. Tahap serum yang meningkat itu sendiri dapat memberikan kesan biologi yang penting. Sebagai contoh, HSP70 yang diberikan secara eksogen memicu lata sinyal proinflamasi yang dimediasi permukaan sel yang membawa kepada ekspresi pelbagai sitokin keradangan. 21,22 Walau bagaimanapun, aktiviti ini diharapkan dapat memberi kesan proatherosclerotic dan bukannya kesan antiatherosclerotic. Yang relevan, kepekatan ekstraselular HSP70 yang diperlukan untuk memberi kesan isyarat adalah kira-kira 2 pesanan magnitud lebih tinggi daripada kepekatan serum yang kami ukur dalam penyelidikan ini. Oleh itu, kami percaya bahawa hubungan terbalik yang kami dapati antara tahap serum HSP70 dan CAD kemungkinan besar disebabkan oleh kesan intraselular molekul, dengan tahap serum yang kami ukur mungkin menggambarkan, secara kasar, tahap intraselular.

Mekanisme pelindung intraselular yang paling jelas berasal dari kesan tindakan kelas utama sel-chaperone dari HSP, yang mempunyai kesan luas pada protein intraselular. Tindakan lain boleh berasal dari fungsi ini atau boleh mewakili aktiviti bebas HSP70. Sebagai contoh, Suzuki et al 23 menunjukkan bahawa HSP72 (protein utama dalam keluarga HSP70) meningkatkan aktiviti manganesexoksida disutase. Enzim ini memelihara fungsi mitokondria dan membatasi apoptosis berkaitan mitokondria semasa kecederaan iskemia-reperfusi miokard. Ethridge et al 24 mendapati hubungan songsang antara tahap intraselular HSP70 dan aktiviti COX-2, enzim proinflamasi utama. Walaupun telah ditunjukkan bahawa hubungan ini berasal dari COX-2 yang menghambat ekspresi HSP70, ia juga telah menyatakan bahawa hubungan timbal balik ini adalah sebahagian daripada gelung maklum balas negatif. Sekiranya demikian, maka ini menunjukkan kesan anti-radang penting HSP70. Yang penting, Shimizu et al 25 menunjukkan pada tikus bahawa HSP70 membentuk kompleks dengan tahap κBα yang menghalang dan mengurangkan pengaktifan faktor nuklear-κB. Kerana faktor nuklear-κB dalam faktor transkripsi utama memodulasi ekspresi gen proinflamasi, ini adalah satu lagi aktiviti anti-radang utama HSP70.

Penemuan berbeza yang berkaitan dengan hubungan dengan CAD HSP60 berbanding HSP70 menarik untuk dipertimbangkan. Antibodi anti-HSP60 sering terjadi pada populasi, dan telah terbukti berkaitan dengan perkembangan aterosklerosis. 1,26,27 Tahap serum protein HSP60 yang tinggi juga didapati berkaitan dengan aterosklerosis. 3,4 Sebaliknya, antibodi anti-HSP70 yang meningkat agak jarang berlaku. 28,29 Pada masa ini tidak diketahui mengapa satu HSP memiliki kemampuan untuk mendapatkan respons autoimun dan membuat predisposisi kepada CAD sedangkan yang lain tidak.

Ia juga harus diperhatikan bahawa Pockley et al 30 melaporkan, berbeza dengan penemuan kami, bahawa 20 pesakit dengan penyakit vaskular periferal dan 13 dengan penyakit vaskular ginjal mempunyai peningkatan tahap HSP70 yang beredar dibandingkan dengan kawalan usia dan seks mereka. Dalam kajian ini, terdapat kepekatan HSP70 yang sangat besar (0 hingga 74 550 ng / mL pada pesakit dengan penyakit vaskular periferal dan 0 hingga1960 ng / mL dalam kawalan). Kami mengkaji 421 pesakit dan mendapati bahawa hubungan antara tahap HSP70 yang lebih tinggi dan kelaziman CAD dan CAD yang lebih rendah berterusan (disesuaikan OR, 0.52 95% CL, 0.32 hingga 0.86) setelah penyesuaian untuk faktor risiko CAD tradisional (umur, seks lelaki, merokok, diabetes, hiperkolesterolemia, dan hipertensi). Oleh itu, hasil yang berbeza antara kajian kami dan kajian Pockley et al mungkin berkaitan dengan jenis pesakit yang dikaji, ujian yang digunakan untuk mengukur tahap HSP70, dan penyesuaian data yang disertakan dalam setiap kajian. Selain itu, Schett et al 31 mendapati bahawa kecederaan miokardium menyebabkan pembebasan HSP60 dan penindasan tindak balas imun anti-HSP65.Hasil tersebut menunjukkan bahawa perbezaan tahap antibodi HSP70 atau HSP70 yang beredar pada pesakit bukan CAD dan CAD dapat disebabkan oleh akibat pembentukan kompleks imun. Mekanisme yang mungkin seperti itu akan menjadi subjek penyelidikan masa depan yang sangat layak.

Ringkasnya, penyelidikan ini memberikan bukti pertama bahawa tahap tinggi HSP70 manusia, seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan kadar serum, dikaitkan dengan risiko CAD yang rendah, mungkin melalui pelbagai kesan perlindungan intraselularnya terhadap tindak balas sel terhadap tekanan. Hasil kajian ini menunjukkan bahawa tahap protein HSP70 dalam serum adalah penanda kuat untuk menurunkan kerentanan CAD dan mungkin bermanfaat, bersama dengan faktor risiko lain yang diakui, dalam menyampaikan risiko keseluruhan individu untuk CAD.


Pemboleh ubah lain

BERDASARKAN hasil visi jangka panjang, AmBisyon2040, data menunjukkan bahawa 79.2 peratus rakyat Filipina hanya menginginkan kehidupan yang sederhana dan selesa dalam 25 tahun. Hanya 3.9 peratus rakyat Filipina yang ingin menjalani kehidupan orang kaya.

Contoh petunjuk di bawah Matatag termasuk bertanya kepada orang Filipina jika mereka dapat menghabiskan cukup waktu dengan keluarga dan rakan, sementara yang berada di bawah Maginhawa dapat merangkumi kejadian kelaparan, kepelbagaian diet dan percutian, antara lain. Petunjuk di bawah Panatag termasuk yang berkaitan dengan keselamatan dan keselamatan, termasuk penjimatan.

"Ini akan memberikan peratusan bagi mereka yang menganggap bahawa mereka menikmati kehidupan matatag, maginhawa dan panatag [stabil, selesa dan aman] yang mereka inginkan," kata Edillon. "Ya, ini dapat menjawab pertanyaan mengenai perdebatan 'layak' ketika menyangkut kejadian kemiskinan berdasarkan FIES kerana berdasarkan tinjauan 2016, [AmBisyon] ini adalah kehidupan yang kita mahukan."

Edillon mengatakan bahawa Neda telah melakukan pretest untuk langkah AmBisyon. Kajian rintis telah dilakukan di seluruh negara tetapi hanya mempunyai 5,000 orang responden. Dia mengatakan itu adalah latihan yang bertujuan untuk menguji kuesioner sehingga angka yang diperoleh dari tinjauan tidak pasti.

Dia berharap dengan persetujuan dan penandatanganan anggaran 2019 pada hari Isnin, pemerintah dapat melakukan tinjauan dasar nasional untuk AmBisyon dalam tahun ini. Neda akan menawar projek itu kepada pihak ketiga, kemungkinan besar institusi penyelidikan, untuk melakukan tinjauan.